煤炭液化真菌的鉴定及其对煤炭的液化

<>本刊特稿<>科技图向导2011年第09期煤炭液化真菌的鉴定及其对煤炭的液化石开仪陶秀祥洪芬芬(中国矿业大学化工学院江苏徐州221008)摘要]本文从土壤中筛选出一株具有液化煤炭能力的真菌,通过形态观察、185rDNA鉴定并构建系统发育树,发现该茵为Hyprocrea属。[关键闻]煤炭液化;真茵;筛选;鉴定;188rDNA煤炭微生物液化是由于具有常温、常压和反应条件温和等优点,受到广泛关注-1。然而,该项技术未能广泛地在工业中应用,其主要原因是微生物液化效率低明。本文主要从土壤中筛选出- - 株液化效果高. Hypocra loir tama157 (AB63714pHrpocreo ixi AH(FJ645728)的真菌,并对其进行18S rDNA鉴定。1.实验材料与方法21| p600[54厂1.1培养基Trchoderme sp V12z 0HQ730130.1)1.1.1筛选培养基:抚顺煤粉15g, KH,P0.0.1 g, KHP0,0.1 g27Trichodema aureouride stain T119 (HQ5969581)MgS04-7H2O 0.04g, (NH)SO4 1.0g, NaCl 0.1 g, CaClh 0.01 g, H2O50 Ceorichum asspsses solate T180 (FJ9382921)1000 mL,琼脂20 g。oos1.1.2 液化培养基:采用SMA培养基或SMB培养基,其组成见参图1真菌AH的系统发育树考文献[4]。Figure 1 Phylogenetic tree of strain AH1.2筛选过程.2.4煤炭液化研究土壤中含有各种各样的微生物,实验中对抚顺西露天煤矿附近土在SMB培养基中进行煤炭液化研究,各密度级的液化率如表1壤、森林土壤枯枝败叶中能液化煤炭的菌种进行筛选。菌种筛选分两所示。次进行,首先，取土样1 g,加入到带玻璃珠的99 mL.去离子水中,即成表1真菌AH对不同密度级的抚顺煤的液化率为10--2的稀释液。吸取1mL稀释液,均匀涂布到菌种筛选培养基上。Table 1 Liquefaction rate of different density coal放入28 C培养箱培养15d。将平板上长出的菌种,在无菌工作台中,用灭菌的接种环挑取少量菌丝,进行划线分离。密度/g*.cmr'残煤/g液化率1%1.3菌种鉴定-1.30.99820.550444.86用试剂盒说明书的步骤将真菌AH的DNA提取出来，然后对18S1.3-1.51.03350.841818.55rDNA进行PCR扩增,再用琼脂糖凝胶回收纯化试剂盒(UNIQ-10)对1.5-1.71.04640.95358.88扩增产物中18S rDNA(800 kb)进行纯化,接着进行克隆,最后将白色菌落送往.上海捷瑞生物工程有限公司对18S rDNA进行测序。利用1.19276.94BLAST对测序结果进行比对,并利用Clustal x及Mega 4.0对菌株进未分选煤1.0270 .0.855416.71行发育分析,并构建出系统发育树。由表可见,对于密度小于1.3g/em3的煤样,灰分为3.33%,液化1.4煤炭液化研究采用SMB培养基进行煤炭液化研究,先接种,再加入- -定量的不率为44.86%,可见筛选的菌种具有较高的液化能力。同密度级抚顺煤,数天后分别对残留煤炭进行洗涤烘干溶煤残留煤2.5液化产物分析粒。用加入的煤量减去残留煤量,然后除以加人的煤量就得到液体液对煤炭生物液化产物的总离子流色谱图与标准谱图比对,其可能的主要化合物的质谱图及其结构式如图2所示。图中,油酸酰胺(化合采用agilent 6890 -5973N气相色谱-质谱联用仪分析液化产物的物7)是总离子流色谱图中最大吸收峰所对应的化合物。其次是十三酰胺(化合物3).13-二氨基-N1.N1-二丁基-N3-萘基丙烷(化合物8)和组成。2.结果与分析24,7-三硝基- 9H-芴-9-酮(化合物1)。同时,由图2还可以证明,产物中也检测到羧酸、酮、酯等结构,与红外光谱分析的一-致。 此外,液化产2.1菌种筛选结果发现有4种真菌能利用抚顺煤作为生长碳源,其中真菌AH长得物中，芳香化合物以1-3个芳环的为主,并且在芳环上有取代基团。最旺盛,其菌落直径为7.4cm,而对照培养基中菌落直径仅为1.4cm。因此选用真菌AH作为抚顺煤液化微生物。为研究真菌AH对煤炭的作用,将其接种到SMA培养基中,观察其形态的变化。发现前期菌丝为白色,后期变绿。同时,将菌丝放在放大400倍的显微镜中观察,以探索其菌丝形态产孢子情况等。形态上观察,菌株的菌丝为对生分枝,白色透明。孢子梗尖端分生孢子,产生大量孢子。孢子呈球形,透明或半透明,无隔。从形态上判断真菌H.lixiiAH为半知菌亚]丛梗孢目木霉属。2.3 18S rDNA系统发育树分析真菌AH的18S rDNA序列已提交至基因库(序列号为.目o0人δ3目ooFJ645728), 构建的系统发育树如图1所示。由图可知，真菌AH与Hypocrea lixii tama 157 (AB563714)有 很高的相似性,其同源性系数图2煤炭液化产物中检测的几种主要化合物达到100%。因此,真菌AH命名为Hypocrea lixii AH。Figure 2 Main compounds detected from GC- -MS(下转第28页)中国煤化工MHCNMH G基金项目:国家自然科学基金资助(50374068);国家自然科学基金委员会创新研究群体科学基金资助项目(50921002);中国矿业大学科技基金资助(E200407); 宿州学院硕士科研启动基金资助项目(2009YSS11).1 1..2011年第09期科技图向导<>高教论述<>响,即三张报表之间计算口径的不一致,降低了财务数据的可比性与的改革是可行的,必须的。同时,我们还应该看到,我国2006年颁布的可靠性。会计准则已实质性趋同或等效于国际会计准则，且通过对2007年和根据《财:务报表列报的初步观点(讨论稿)》的观点,对海尔公司的2008年新会计准则运行情况的调查统计，财政部和证监会对新准则财务报告的数据进行调整,得到表4。的执行情况总体上持肯定态度。在这种情况下,我国上市公司的财务表4青岛海尔股份有限公司2007- -2009 年调整后财务数据报告如果采用新的列报模式,企业需要耗费巨大成本,并对现有体系项目2007年.2008年2009 年进行全面调整,还需对会计人员进行培训转换成本很高。同时,由于新的列报模式，需要提供更多细节的分解信息,也增加了8常的运行净经营资产4.08.66.477.64 5,.408.039,928.18 2,061.974.011.7成本。因此,目前我国不宜立即进行财务报告制度的改革,应坚持渐进净金融资产| 24.434.05.66 207485.96.88 7503726.472.97式改革的思路，努力做到财务报告制度和国际财务报告准则实质的、持续的趋同。| 净经营资产增长率15.86%-1.65%我们还应该认识到,趋同不是单方向的靠拢,对于这场变革,我国净金融资产增长率-61.87%239.92%要利用国际金融危机后西方世界全面反思金融监管体制和财务监督注:数据来源于EMIS数据库机制的有利机会,努力使国际财务报告准则的改革过程充分考虑我国结合表3和表4,我们可以更清晰地看出,海尔公司2008年和实际情况， 并将我国的成功经验变成国际公认的准则,不断提高我国2007年相比,资产的增加主要是由于经营资产的增加;而2009年和企业会计行业和组织机构在国际财务报告组织框架内的话语权。科2008年相比,虽然资产增长了80.41% ,但是这主要是由于金融资产的增加。[参考文献]对比现行财务报表和按照分类列报调整后的财务报表数据,我们[1]温青山,何涛.基于财务分析视角的改进财务报表列报效果研究一来自中可以看到,现行的财务报表只能消极的揭示资产的变动情况,无法揭石油和中石化的实例检验.会计研究,2009,10: 10-17.示这种变化的原因及对公司经营的持续性影响,而分类列报改革后的.[2]孟完巨.基于企业价值的财务报表分析体系及改进财会研究209,18.39-财务报表则可以动态的显示出资产变化的原因,从而提高财务报表的40.[3]李煦财务报表分析的局限性及对策探讨财政监督,2009,8:28- 29.4.结论及建议[4]于建波.企业财务报表附注问题的探讨会计之友, 2009.14:24- 25.从以上的分析中,我们可以看到,财务报表分类列报从理论上可[s]王仲兵论财务 报表列报方式变革:动因.挑战与趋同路径上海立信会计学以加强财务报表之间的联系,提高信息对报表使用者的价值,可以帮院学报2010.24(1):48- 53.助报表使用者更好的决策;另-方面 ,在经济全球化、- -体化的背景[6]张金若,宋颖.关于企业财务报表分类列报的探讨，会计研究，2009.9:29 -35.下，国际经济交流日趋频繁，为降低财务信息理解与利用成本促进资[7]ASB.D. ri Paper Peimin Views " Fim inl Sue Prrlainn本跨区域流动,客观上需要-套统- -的财 务报表格式。因此,财务报表" "w iboara20(-上接第13页)计算如下:溢价,无风险利率等综合计算得出。为简化计算,本文用这-行业平均(1)税后净营业利润确定收益率5.67%代替。①利润总额:142万元(3)该单位所占用的全部资本的机会成本: .②非经常项目涉及的金额:5000x4.17% +6000x5.67%=548.7万元。补贴收人本年度为0(4)综上,该单位2009年的EVA数据为:营业外收支净额. -10万元294 -548.7= -254.7万元合计:-10万元.从计算结果可以看出:只看利润,该单位经营业绩表现不错。但采③本期利息费用(利息支出)为:240万元用EVA指标,考虑了股东资本和债务资本的机会成本后,考核结果就④当年创造的税后净营业利润为:截然不同了。导致EVA小于会计利润的原因很多,其中很重要的一一点(142+10+240)x(1- -25%)=294万元就是企业在经营过程中对债务成本以外的机会成本(如股权成本)或(2)占用资本的机会成本是自有资金成本的重视程度不足。报业集团在对下属单位的业绩评价①生产经营所使用的债务资本:中引入EVA指标,附带建立以经济增加值为核心的薪酬激励机制,可根据资产负债表中2009年数据:以促使下属单位加以关注集团运营资金投人的方向。看短期借款3000万元长期负债2000万元,合计5000万元09年商业银行短期借款利率:5.31%;长期借款利率:5.94% ,可得:(3000x5.31%+2000x5.94% )+5000x( 1-25%)= 4.17%[1]孙娜EVA,企业业绩评价的里程碑财会学2007(02).②生产经营所使用的权益资本:[2 ]甘林君经济增加值(EV A)研究评述中国总会计师，2007 ,(08).[3]常永新传媒集团公司治理北京:中国传媒大学出版社2006.少数股东权益0、股东权益6000万元,权益资本合计6000万元[4 刘海贵中国报业发展战略.世纪出版集团上海人民出版社.2006.权益成本的计算,-般根据行业选择不同的贝塔系数、市场风险一●(上接第11页)3.结论与讨论Liquefaction of Untreated Hard Coal.Resour Consver Ree,1981 ,():251-260.实验中,从土壤中筛选出的真菌具有将液化抚顺煤液化成小分子矿业大学学报,20中国煤化工的能力，为该菌的工业应用奠定了基础。[3]佟威,孙玉梅CNMHG响因素的研究I.煤炭转化, 1996, 19(3):63YH[4]石开仪,陶秀祥,尹苏东等抚顺褐煤的微生物溶煤J.中国矿业大学学报,330 27[1]Fakoussa R M.Production of water- -soluble Coal Substance by Partial Mierobial 2007 ,36(3):339-342.28.