白芍超声提取工艺研究

表2含 Urease流出液成分分析CnA经 Sephadex G-50亲和层析后比活提高流出液体积蛋白质浓度66.13倍,比活达6976.83IUmg,得率为80.68%纯度达到电泳纯。220.212.5(onA纯度鉴定纯化样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳得条蛋白带,表明所分离纯化的样品已达1B.B.L. Agrawal,eta. pacific binding of concanavalin A到电泳纯。rosslinked dextran gels. Biochem. J, 1965, 96: 26ConA分离纯化结釆见表3。2中山大学生物系生化微生物学教研室,生化技术导论表3CoMA分离纯化结果北京:人民教育出版社,1978:2053 B B L. Agrawal, et al. Isolation of concanavalin A by specific分离步骤白质得率CH得率比活力纯化倍数adsorption on cnss linked dextran gel. Biochem Biophys.ActH洋刀豆豆子100105.50.00缓冲液提取68.859.724 Irvin E. Liener. 'The photometric determination of the h:mag微滤65.2685,09137.561.30glutinating activity of soyin cnide soybean extracts. Arch亲和层析686976.8366.13Biochem. biophys. 1955. 54: 223洋刀豆豆子屮CnA经缓冲液提取,微滤澄清5蒋传葵,等.I县酶的活力测定,上海:上海科技出版社,1982:117后,经两次 Sephadex G50亲和层析,纯化的ConA血6 Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation凝比活提高66.13倍,得率80.68%。of microgram quantities of prolein utilizing the principle of3结论teinrdye binding Annal. Biochem 1976, 72: 248笔者用 Sephadex G50亲和层析技术对洋刀豆7张业旺,等,超滤处理刺五加提取液.水处理技术,提取液中ConA和 Urease进行了分离并对ConA进行2001,27(2):99了纯化。Dhubis M Colorimetric method for determination of sugar and re-通过对提取液微滤预处理,料液的澄清度得到lated substance. Anal. Chem. 1956, 28: 350明显提高,但ConA和Urae的活性分别损失9 Andrew C.pean.l. Serun protein electrophoresis in acry-6.20%和9.50%,蛋白质损失5.21%mide gel: pattens from nomal human subjects. Scit预处理后提取液,经过 Sephadex G-50亲和层析147:145l柱,可使提取液中ConA和 Urease得到完全分离(2002-07-21收稿)白芍超声提取工艺研究R33 A广州陈李济药厂(5I0290)林庆义汪世琼摘要目的:探讨用超声提取法提取白芍中芍药甙的工艺条件,为超声提取在业生产中的应用积累参数方法:设计正交试验,对白芍的超声提取工艺进行研究,确定最佳提取艺条件。结果:最佳T艺为川1-2m粒药材,加10倍量水超声提取两次,每次90mina关键词白芍芍药甙正交试验超声提取白芍为毛茛科植物芍约 Pannonia lactifera Pall.剂,从而提高提出率,缩短提取时间,并且免去了高的十燥根,是最常用的中药材之一,其主要有效成分温对提取成分的影响。丙此超声波作为提取的一种为芍药甙、丹皮酚等。文献报道白芍传统水煎煮.手段,具有良好的应用前景。本实验以白芍为研究艺中,芍药甙损失率高达40%以上,白芍中芍药对象,以其有效成分芍药甙为指标,高效液相色谱法甙在生产过程中含量下降主要是受热帔坏,因此,工测定其含量,对超声提取白芍中芍药甙的艺进行艺过程中应尽量避免长期高温受热。研究表明,利出立中的应川积累参数。用超声波产生的强烈振动高的加速度、强烈的空化中国煤化工效应、搅拌作用等,都可加速药物有效成分进入溶CNMHG司,经鉴定符合中中药材第25卷第10期2002年10月国药典(1995年版·部)白芍项下规定。芍药甙对表2正交试验结果照品,购自屮国药品生物制品检定所。仪器: Shimu-实验号ABCdaz lc10AD色谱仪, Shimudaz Lc-10AD泵,SPDD)含量(%)0A紫外检测器(日本岛津),CQX2536型超声波清1.3650洗器(上海必能信超声有限公司)。试剂:甲醇为色谱纯(天津协和试剂));其它试剂均为分析纯。2.31422方法与结果2.1测定方法2.1.1色谱条件:色谱柱 Turner C18(4.6×200mm1222335山l);流动相:甲醇-水(40:60);流速:Imd/min;检测23131223312232.18641.3273波长:230mm;柱温:37℃2.1.2标准曲线:配制系列不同浓度的芍药甙标K15.83055.1569402145209准溶液各进样10d,以对照品溶液浓度为横坐标,K25.46435.6685.82005.31峰面积为纵坐标绘制标准曲线(在18.8-94四/mnl485.35966.3495.599范围内为一直线),回归得方程:A=93457.987X-H0.94200.50992.32057479.508(r=0.999)。表3方差分析表2.13样品含量测定:精密量取样品液各5m加方差来源离差平方和s自由度均方F适量甲醇,振摇,滤过,用甲醇定容至25m,用微孔A0.16330.081722.07作滤膜滤过,照2.1.1所述色谐条件分别进样10μl,测B043920.02205.93P>0.05得芍药甙峰面积,计算出样品中芍药甙含量C20.49)133.5P<0误差e20.003722.1试验因素水平:主要考察提取时间药材粒和106度、加水量对芍药甙提取率的影响,方案见表1。32从表3可以看出药材粒度对结果影响最大表1试验因素水平表超声时间对结果也有显著影响,从经济、省时的塬则因素考虑,生产上应把药材的粒度作为关键因素考察。水平A超卢时问B加水量加水量对提出率没有明显的影响提取时加10倍量倍)C药材粒度空白)水是最合适的。3.3本研究旨在对超声提取的应用进行数据积5~7累,文献报道超声波适川厂提取含生物碱、甙类的药材。因白门芍中芍药甙受热易分解,而超声提取不需222工艺过程:取白芍2kg9份,分别按I4(34)加热,故有可能减小芍药甙的损失,从而可提高药材正交表试验,超卢提取两次,合并提取液,滤过,定的利用率。容得1-9号样品液,测定芍药甙含量,结果见表34超声提取的影响因素很多,也十分复杂、表3时间和实验条件,对超州波功率频率、提取次数3讨论剂和温度等因素未作考察,尚待进一步研究。3.1各因素对试验结果的影响次序为C>A>B,在木实验条作下最佳提取条件为A1B2C3,即用1~参考文献nn粒度的约材,加10倍量的水超声提取两次,每次1黄夏敏,等,白芍在中成药生产过程中芍药甙含量变化90min。设定D为空项,R值较小,说明A、B、C三者的研究,中药新药与临床药理,19%,9(4):236无交互作用。2002-07-17收稿中国煤化工CNMHG中药材第25卷第10期200年10月