聚乙二醇对人源ABO定型血清效价的影响

第四军医大学学报990240第四军医大学学报资源系统 JOURNAL OF THE FOURTH数字化期刊 WANFANG DATA (CHINAINFO) MILITARY MEDICAL UNIV ERSITY DIGITIZED PERIODICAL1999年第20卷第2期Vol.20No.21999聚乙二醇对人源ABO定型血清效价的影响杨世明杨枨林关键词:聚乙稀二醇类;定型血清ABO血型系统;效价中图号:R457.11文献标识码:B0引言实验观察与应用表明聚乙二醇(PEG)能增强酶法配血和间接抗人球蛋白试验的敏感性,缩短了配血试验和不完全抗体的检测时间[1.为了解PEG能否提高人源ABO定型血清的效价,我们用PEG浓缩人源ABO定型血清对PEG不同分子量、不同浓度、不同浓缩时间和温度对血清效价的影响以及浓缩后不同层次的血清效价进行了实验比较和应用1材料和方法1.1试剂与器材PEG试剂,日本进口天津天秦精细化学品有限公司分装批号930109.pH7.0磷酸盐缓冲液(PBS),9g/L生理盐水单抗血清扭力天平离心沉淀器低温离心机水浴箱玻璃试管和瓶子等1.2实验与应用方法收集献血员化验检查肝功合格的标本血清置4℃冰箱48h吸收冷凝集素离心分离血清置56℃水浴箱30min活用50m/新鲜红细胞悬液测定原血清基础效价.上述血清加入等量PEG溶液,混匀放15min~60min,3000r/min离心10min~30min弃去上清液沉淀物按100g/L加入生理盐水稀释再测定浓缩后的血清效价、亲和力和特异性,合格后置-20℃冰箱保存;将因故不输的血液收集低温离心30min,分离血清置56℃水浴1h以3000r/min离心30min,分离上层血清测定其效价、亲和力和特异性后按上述方法浓缩.1.3结果判定测定PEG浓缩前、后血清效价、亲和力和特异性所有试验重复3次测定10份标本浓缩后血清效价均增高2个滴度和积分均增加13以上判为效价提高.2结果2.1不同PEG分子量对血清效价的影响将种不同分子量的PEG粉剂均按200mL/浓度配制加入等量血清搅拌浓缩分离血清测定效价结果显示PEG6千提高血清效价的效果非常明显,PG-1万和PEG-2万效果较差(表1)2.2Peg浓度对血清效价的影响用PBS将PEG-6千粉剂分别配成200g/,150g/L和100g/L的浓度,用不同浓度的PEG溶液浓缩抗A血清结果表明150mL/L的PEG浓度提高血清效价的效果最好(表2)第四军医大学学报990240表1不同PEG分子量浓缩前/后效价的比较PEG分子量效价积分亲和力/s2万32/3237/37>30/>301万32/3237/37>30/>300.6万32/12837/85>30/<15表2不同PEG浓度浓缩前/后效价的比较PEG浓度/ml'L-1效价积分亲和力/s20032/6437/59>30/>2015032/51237/95>30/<1010032/3237/47>30/>252.3不同层次血清效价的比较将150溶液与血清等量混匀30min后,3000r/min离心30min,测定不同层次的血清效价结果沉淀物效价为512积分95亲和力<10明显高于1/2和下1/3层的血清效价(表3).表3PEG浓缩后不同层次血清效价的比较血清层次效价积分亲和力/s1/24813>30下1/323>25沉淀物51295<102.4浓缩时间对血清效价的影响将PE溶液与血清混匀分别浓缩15min,30min和60min,结果15min,30min效价均为256积分83,60min效价为512积分95.2.5不同浓缩温度对血清效价的影响将PEG溶液与血清混匀后分别置4C,22℃和37℃浓缩,结果4C效价512积分95,22C效价256积分83,37效价128积分71.2.6血清抗体特异性测定将浓缩后的定型血清分别与A型、B型、O型和AB型各10名献血员红细胞作凝集试验证实特异性合格.3讨论高质量的ABO定型血清是正确鉴定血型确保输血安全的前提近年来发达国家已有用单抗血清取代人源ABO定型血清的趋势但国内该工作起步较晚且单抗血清还存在着因其特异性强而只能判别一个抗原决定族可能会使一些A、B亚型漏检因其浓度高就有大得多的机会与另一些非特异性分子发生假阳性反应[2]以及单抗血清本身也易被细菌污染而造成血型误定等缺点[31,目前还不能完全取代人源ABO定型血清因此对人源ABO尤其是稀有定型血清进行最适制备、保存和提高其效价的方法学研究仍有重要意义.我们研究结果发现PEG-6千及其150g/L浓度提高血清效价的效果最明显PEG提高人源ABO定型血清效价可能与血清抗体是免疫球蛋白PEG是线形大分子物第四军医大学学报990240质,具有极强的亲水性加入反应体系后经离心力的作用致使血清蛋白浓缩和沉淀[4],从而显著提高血清效价.我们先后收集A,B型血清各800mL(效价32)用此方法浓缩后血清效价均提高到256~512积分83~95亲和力s~12s出现凝集,3min时凝块大于1.5mm2经与传统方法制备的ABO定型血清和单抗血清进行8000余人次的试验比较同时用PEG溶液作阴性对照结果符合率为100%用PEG浓缩法提高人源ABO定型血清效价方法简便效果明显,不需特殊仪器设备PEG容易购买毒性低长期贮存不变质此法具有废物利用节约血液资源降低成本费用提高经济效益等优点.作者简介:杨世明,男,43岁,主管技师作者单位:杨世明杨枨林第四军医大学唐都医院输血科陕西西安710038参考文献1杨世明杨枨林洪炳炎聚乙二醇快速检测不完全抗体及其应用第四军医大学学报,199516(1):74-752李振才红细胞血型及血型诊断试剂研究进展见:全军输血专业管理委员会编.输血与输血相关领域研究进展.北京军事医学科学出版社,1996:17-203方志明沈光赵桂珍.超浓缩法制备人源抗血清定型试剂的质量观察中国输血杂志,19958(3):131-1324桂勇陈宏础黄天禄.用PEG分离血清高密度脂蛋白胆固醇及其亚组份的方法学探讨临床检验杂志,19875(4):170-172编辑王小仲收稿日期:1998-02-17;修回日期:1998-06-15