马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚的合成研究

承德医学院学指JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGEVol.30 No.1 2013护士培训中的应用[].现代临床护理,2010, 9(3):57-58.[5] 徐岚,徐薇,韩颖,等.内镜消毒质量调查及其影响因素[3] 李小寒.浅谈非语言护理沟通技巧J].实用护理杂志2000,分析[].中国感染控制杂志,2008, 7(2);117- -121.16(5):58- -59.[6]殷积美, 刘冰熔,刘巍.消化内镜清洗消毒在监控管理中4]李筱轶,贾志英,冯忠军,等.石家庄市12所医院消持续改进的探讨[].中华医院感染学杂志,2008, 18(8);化内镜清洗消毒管理现状调彭[0.中华医院感染学杂114-1115.志,2009,19(5):536- -538.(收稿日期:2012- 09-07)(护理学栏目鳎辑:张健)技术方法马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚的合成研究郑霄,李云峰,王 良友,尹志峰(承德医学院中药研究所,河北承德067000)[关键词]聚乙醇;马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚;纯化[中图分类号]R914.5[文献标识码]A[文章编号]1004- 6879(2013)01-0053-02随着生物技术的快速发展，越来越多的蛋白质多肽类mPEG-MAL5 0。通过对合成mPEG- -MAL后处理方法的药物在疾病的预防和治疗中得到应用。虽然蛋白质多肽类优化选择,得到了产率较高、纯度较高的产物，具有较高的药物的作用位点专一、疗效确切,但溶解度低、稳定性差、应用价值。半衰期短、存在免疫原性等缺陷,限制了它们的给药途径1材料与方法和药效的发挥。聚乙二醇(PEG)修饰可以很好地解决上述1.1 试剂单甲氧基聚乙二醇(PEGg00 -0H),美国Sigma问题"。公司;二氯甲烷.三乙胺、对甲苯磺酰氯、乙醚、邻苯二甲PEG是一种pH中性、无毒.水溶性较高的亲水聚合酰亚胺钾盐、N,N-二甲基甲酰胺、无水乙醇、水合肼、二物，由环氧乙烯单体聚合而成。由于PEG反应官能团末端氧六环、马来酸酐、乙酸酐、无水乙酸钠均为分析纯试剂。羟基的化学性质不活泼而且选择性不强,难以对蛋白质1.2 仪器旋转蒸发器RE- -52AA,上海亚荣生化仪器和多肽类药物进行定点修饰,通常需要对其末端的官能厂;WFH- -203三用紫外分析仪，上海精科实业有限公司;团进行活化,然后将活化后的PEG衍生物通过化学方法高效液相色谱仪,美国Alltech公司;分析柱Accurasil Crg偶联到药物上。在对蛋白质多肽类药物巯基定点修饰中，反 相硅胶柱(4.6X250mm),大连依利特分析仪器有限公使用较多的活化PEG是马来酰亚胺基聚乙二醇单甲醚司。(mPEG- MAL)。为避免在修饰过程中发生交联和团聚,通1.3 合成路线见附图。常采用单甲氧基聚乙二醇(mPEG- -0H)作为修饰剂的合成原料2-。本研究首先在碱的催化下,用mPEG- -0H与对甲苯磺酰氯(Ts -C1)反应得到单甲氧基聚乙二醇对甲苯磺酸2-(酯(mPEG- -OTs),然后根据盖布瑞尔合成法原理,以邻苯二甲酰亚胺钾盐为亲核试剂与mPEG--OTs反应，生成单甲氧基聚乙二醇的邻苯二甲酰亚胺衍生物,再与水合肼反应肼解生成氨基化单甲氧基聚乙二醇(mPEG-NH),由马中国煤化工域来酸酐与mPEG- NH2发生缩合,再经脱水得到最终产物1.3 合成方HCNMH G●53.承德医学院学扑JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGEVol.30 No.1 20131.3.1 mPDG -OTs的制备:称取mPEGs0 -0H 5g(1mmo)1:1.3:1反应，用RP-HPLC监测反应进程，观察mPEG-置于茄形瓶中,加入20ml二氯甲烷溶解,再加入0.86ml三MAL峰、多肽峰与新物质峰的生成变化,其保留时间符合乙胺(6mmol)和1.14g的对甲苯磺酰氯(6mmo),室温下搅理论值,证实其活性。拌反应24h。反应过程中用TLC(甲醇:二氯甲烷=1:6)检测3讨论反应进程,待原料点消失,表明反应完全,依次用0.1%柠檬在mPEG--MAL的合成中,经过两种不同的后处理酸钠溶液、饱和氯化钠溶液洗三遍,无水硫酸钠干燥。减压纯化方法。除上述方法外,有文献报道将反应结束后的反旋蒸除去溶剂,加无水乙醚沉淀出固体,抽滤,产物为白色应液过滤除去不溶物，80C减压旋蒸除去溶剂，残余物加固体,放入干燥器中于燥。得到产品4.85g,产率97%。入二氯甲烷溶解,再加入适量活性炭,放置30min.滤除活1.3.2 mPDG -NH2的合成:将4.5g mPFGx0 -0Ts0.9mmol)性炭,减压旋蒸溶剂，加入无水乙醚沉淀，千燥得到终产溶于15ml N,N-二甲基甲酰胺中,加入1g邻苯二甲酰亚胺物mPEG--MAL6.经过多次重复和比较试验后，在RP-钾盐(5.4mmo), 120C下氮气保护反应4h.90C减压旋蒸除HPLC检测下,采用此方法在较少剂量时,可以得到和前去溶剂,将残余物溶于35ml无水乙醇,加入3.5ml水合肼,述方法产物纯度相当的产物，但在加大剂量时,用此法则90C加热回流反应4h.60C减压旋蒸除去溶剂,产物溶于二无法得到所要产物。分析可能是大剂量反应时,要长时间氧甲烷,滤去不溶物，依次用纯水、饱和氯化钠溶液洗三遍，高温旋蒸除去溶剂，使mPEG- -MAL中的五元环断裂,产无水硫酸钠干燥。TLC点板。减压蒸去溶剂,加无水乙醚沉生了其它副反应,破坏了原有产物。淀出固体,抽滤,产物为白色粉末状固体,放入干燥器中千本研究比较了几种后处理纯化方法,进行了多步的燥。得到产品4.2g,产率93%。纯化操作,简化了操作步骤,优化了纯化方法,减少了产1.3.2 mPDG- -MAL的合成:将3g mPDG00 NH2(0.6mmol)物损失,得到的产物纯度较高，由mPEG--NH2得到产溶于30ml二氧六环中,在80“磁子搅拌的条件下与0.24g物mPEG- -MAL的产事达到76%,高于其它文献记载的马来酸酐(2.4mmol)反应30min。待反应结束,于55C下旋48%6。本研究可为实验室或其它单位合成mPEG-MAL蒸除去二氧六环,乙醚沉降,干燥。将所得固体溶于30ml提供借鉴经验。乙酸酐,加入1g无水乙酸钠, 100C下搅拌反应45min。滤[参考文献]除反应液中的固体,向反应液中加入10倍乙酸酐体积的[1]路娟， 刘清飞，罗国安，等.药物的聚乙二醇修饰研究进展[J].有机化学,2009,29(4):1167-1174.纯水，然后用二氯甲烷萃取水层三次,二氯甲烷层经饱和[2] Zalipsky S.Chemistry of polyethylene glycol conjugates with氯化钠溶液洗三次后,无水硫酸钠干燥.TLC检测。减压biologically active molecules []Advanced Drug Delivery蒸去溶剂，乙醚沉降,抽滤,得到淡褐色固体2.3g,产率Reviews,199,16(2-3);157-182.76%。[3] KoganTP. The sythesis of subsited mtbosploytylaneglyco)2结果derivatives suitable for selective protein mifiatin[]. Synthetic反应过程中通过TLC检测判断产物的有无及反应程Communications, 1992, 2(6)2417-2424.度。mPEG- -OH点为碘显色,mPEG- -OTs 点碘显色.254nm[4] 王良友, 刘克良.多肽和蛋白质的聚乙二醇化修饰方法[].有机化学, 2003, 1(23): 1320-1323.紫外下显色,mPBG- -NH2 茚三酮显色,mPBG- -MAL点紫外[5] 王孝杰, 孙建平,李效东，等.氨基化单甲氧基聚乙二醇显色。最终产物进行RP -HPLC分析,检测波长为215nm,梯的合成研究[].精细化工中间体,2006,36(1):40- -42.度洗脱A:0.0S% TFA/H20.B:0.0S% TFA/70% CHzCN[6] 蒋志龙. 基于胸腺素a 1活性片段的环肽类似物的设计/H20,流速为1m/min.mEGoo-MAL保留附间29.273min。合成与活性评价[D].北京:中国人民解放军军事医学科学院,2004.将mPEG--MAL与联接半胱氨酸的多肽分别以当量1:3、(收稿日期:2012- -08- -25)(技术方法栏目编辑:张健)中国煤化工MHCNMH G●54.