DB32/T 2265-2012 鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定  双波长分光光度法 Determination of amylase and amylopectin content in fresh corn Dual-Qavelength Spetrophotometry

    本标准规定了双波长分光光度法测定鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。
   本标准适用于乳熟后期至蜡熟初期收获的鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。？[第1页] ICS65.020.01 B22 备案号： DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 2265—2012 鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定 双波长分光光度法 Determination of amylase and amylopectin content in fresh corn Dual-Qavelength Spetrophotometry 2012-12-28发布 2013-02-28实施 发布 江苏省质量技术监督局 [第2页] DB32/T 2265—2012 前 言 本标准按GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求编写。 本标准由江苏省农业科学院提出。 本标准起草单位：江苏省农业科学院农产品加工研究所、国家农业科技华东（江苏）创新中心农产 品加工工程技术研究中心。 本标准主要起草人：宋江峰、刘春泉、李大婧、林美娟、刘春菊、吴海虹、牛丽影、崔莉、江宁。 [第3页] DB32/T 2265—2012 鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定 双波长分光光度法 1 范围 本标准规定了双波长分光光度法测定鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。 本标准适用于乳熟后期至蜡熟初期收获的鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 7648-1987 水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 根据双波长比色原理，若试样溶液在两个波长处均有吸收，则两个波长的吸光差值，与溶液中待测 物质的浓度成正比。从待测样品液中的直链淀粉、支链淀粉分别与碘生成络合物的吸收图谱中，可以确 定测定波长和参比波长。淀粉与碘能形成螺旋状结构的碘-淀粉复合物，它具有特效的颜色反应，其中 直链淀粉与碘生成纯蓝色复合物，而支链淀粉与碘依其分枝程度生成紫红-红棕色复合物。因此两种淀 粉与碘作用时会产生不同的光学特性，从而表现出特定的吸收谱及吸收峰。 4 试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682-2008中规定的水。 4.1 直链淀粉标准品 直链淀粉标准品的制备参照 GB 7648-1987中附录Ａ（参考件）操作。 4.2 支链淀粉标准品 支链淀粉标准品的制备参照 GB 7648-1987中附录B（参考件）操作。 4.3 盐酸（HCl）。 4.4 氢氧化钾（KOH）。 4.5 石油醚（沸点30 ℃ ～ 60 ℃）。 4.6 碘（I2）。 4.7 碘化钾（KI）。 4.8 碘试剂 称取 2.0 g碘化钾，溶于少量蒸馏水，再加 0.2 g碘，待溶解后用蒸馏水稀释定容至 100 mL。每 天用前现配，避光保存。 4.9 直链淀粉标准贮备液 称取0.1000 g直链淀粉标准品，置于 50 mL容量瓶中，加入 1 mol/L 氢氧化钾溶液 10 mL，在热 1 [第4页] DB32/T 2265—2012 水中待溶解后，取出用蒸馏水定容至刻度，摇匀并静置，制备2 mg/mL直链淀粉标准贮备液。 4.10 支链淀粉标准贮备液 称取0.1000 g支链淀粉标准品按（4.9）法制备 2 mg/mL支链淀粉标准贮备液。 5 仪器和设备 5.1 双光束分光光度计 带波段扫描。 5.2 分析天平 感量为0.01 g和0.1 mg各一台。 5.3 pH计 pH计精度为 ± 0.01，使用前校正。 5.4 索氏抽提器。 5.5 恒温水浴锅。 5.6 鼓风干燥箱。 5.7 组织捣碎机。 6 试样制备 将鲜食玉米籽粒样品用组织捣碎机捣碎，置于 60 ℃鼓风干燥箱中烘干，使其水分含量降低到10 % 以下，过孔径为 0.25mm试样筛。称取 1 g的烘干样品放入索氏抽提器中，加入 35 mL石油醚，加热回 流脱脂4 h，然后放入鼓风干燥箱中烘干，挥去残余的石油醚。 7 检验步骤 7.1 提取 准确称取脱脂样品0.1000g，置于 50 mL容量瓶中，加 1 mol/L 氢氧化钾溶液 10 mL，在 75 ℃水 浴中充分溶解20 min，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置 15 min后过滤。 7.2 测定 精取5 mL滤液，置于50 mL容量瓶中，加25 mL蒸馏水，以0.1 mol/L 盐酸溶液调pH至3.0，加0.5 mL 碘试剂，用蒸馏水定容至刻度。于室温静置25 min后，以样品空白液为对照，用1 cm比色杯，分别测定 样品液λ 1、λ 2、λ 3、λ 4的吸收值Aλ 1、Aλ 2、Aλ 3、Aλ 4，得到△A样直，△A样支，再与标准化系 列比较定量。 7.3 标准曲线绘制 7.3.1 选择直链、支链淀粉测定波长、参比波长 分别吸取 1.0 mL、5.0 mL直链和支链淀粉标准贮备液置于 50 mL容量瓶中，加蒸馏水 25 mL，以 0.1 mol/L 盐酸溶液调 pH至3.0，加0.5 mL碘试剂，并用蒸馏水定容。室温下静置 25 min。以蒸馏水 为空白，用双光束分光光度计进行可见光全波段扫描绘制直链和支链淀粉吸收曲线。根据原理（3）确 定直链淀粉和支链淀粉的测定波长λ 1、λ 2，参比波长λ 3、λ 4。 7.3.2 双波长直链淀粉标准曲线绘制 分别吸取0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL和 1.3 mL直链淀粉标准贮备液，置于 50 mL 2 [第5页] DB32/T 2265—2012 容量瓶中，加25 mL蒸馏水，以 0.1 mol/L 盐酸溶液调 pH至3.0，加 0.5 mL碘试剂，用蒸馏水定容。 室温下静置 25 min后，以蒸馏水为空白，用 1cm比色杯在λ 1、λ 3两波长下分别测定 Aλ 1、Aλ 3， 即得△A直= Aλ 1-Aλ 3，以△A直为纵坐标，直链淀粉浓度（mg/mL）为横坐标，制作双波长直链淀粉 标准曲线。 7.3.3 双波长支链淀粉标准曲线绘制 分别吸取 2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL、4.0 mL、4.5和 5.0 mL支链淀粉标准贮备液，置于 50 mL容量瓶中。以下操作同（7.3.2）。以蒸馏水为空白，用1cm比色杯在λ 2、λ 4两波长下分别测 定Aλ 2、Aλ 4，即得△A支= Aλ 2-Aλ 4，以△A支为纵坐标，支链淀粉浓度（mg/mL）为横坐标，制作 双波长支链淀粉标准曲线。 8 结果计算 每100克鲜食玉米籽粒中直链淀粉和支链淀粉的含量分别按式（1）和式（2）计算。 C ？50？10？(1？ W？ W ) 1 1 2 ………………………………………………………………（1） Y？ ？100 1 M？1000 C ？50？10？(1？ W？ W ) 2 1 2 …………………………………………………………………（2） Y ？ ？100 2 M？1000 式中： Y1——试样中直链淀粉的含量，单位为克每百克（g/100g）； Y2——试样中支链淀粉的含量，单位为克每百克（g/100g）； C1——标准曲线查得的样品液中直链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； C2——标准曲线查得的样品液中支链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； M——测定用脱脂样品的质量，单位为克（g）； W1——试样中水分含量，单位为克每百克（g/100g）； W2——试样中粗脂肪含量，单位为克每百克（g/100g）； 计算结果保留至小数点后 2位。 9 方法测定低限和允许差 9.1 本方法对鲜食玉米籽粒中直链淀粉和支链淀粉的测定低限为0.1g/100g。 9.2 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 3 [第6页] DB32/T 2265—2012 附录A （资料性附录） 直链淀粉与支链淀粉参比波长分析 A.1 直链淀粉与支链淀粉参比波长分析 1 直链淀粉吸收曲线 1.0 2 支链淀粉吸收曲线 0.9 1 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 2 0.2 0.1 λ 2 λ 1 λ 3 λ 4 0.0 400 450 500 550 600 650 700 750 800 波长/nm 图A.1 直链淀粉与支链淀粉参比波长分析 4 吸光值/Abs