DB44/T 543-2008 水产种苗中氯霉素残留量的测定气相色谱法 Determination of chloramphenicol residue in fishery seedling by gas chromatography

本标准规定了水产种苗中氯霉素残留量的气相色谱测定方法．
本标准适用于水产种苗中氯霉素残留量的定量测定。？[第1页] ICS 67.050 B 50号 DB44 广 东 省 地 方 标 准 DB44/T 543-2008 水产种苗中氯霉素残留量的测定 　　　　　气相色谱法 Determination of chloramphenicol residue in fishery seedling by gas chromatography 2008-07-11发 布 2008-10-01实 施 广 东 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 [第2页] DB44/T 543-2008 刖 青 本 标 准 的 附 录 人 和 附 录 B为 资 料 性 附 录 ． 本 标 准 由 广 东 省 海 洋 与 渔 业 局 提 出 ． 本 标 准 由 中 国 水 产 科 学 研 究 院 南 海 水 产 研 究 所 质 量 与 标 准 化 技 术 研 究 中 心 归 口 ． 本 标 准 起 草 单 位 ： 农 业 部 渔 业 环 境 及 水 产 品 质 量 监 督 检 验 测 试 中 心 （ 广 州 ） 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 甘 居 利 、 李 刘 冬 、 林 钦 、 陈 洁 文 、 陈 培 基 、 杨 美 兰 。 [第3页] DB44/T 543-2008 水产种苗中氯霉素残留量的测定气相色谱法 范 围 本 标 准 规 定 了 水 产 种 苗 中 氯 霉 素 残 留 最 的 气 相 色 谱 测 定 方 法 ． 本 标 准 适 用 于 水 产 种 苗 中 氯 霉 素 残 留 盈 的 定 量 测 定 。 2规范性引用文件 　 　 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 ． 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 ． 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ． 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 。 　 　GB/T 6682分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 实jA方 法 3原理 　 　 试 样 经 乙 酸 乙 酯 萃 取 ， 萃 取 液 蒸 千 后 用 抓 化 钠 溶 液 溶 解 提 取 物 ， 经 正 己 烷 脱 脂 后 用 乙 酸 乙 酯 反 萃 取 ， 用 无 水 硫 酸 钠 脱 水 ， 硅 烷 化 试 剂 衍 生 化 ， 用 配 有 电 子 捕 获 检 测 器 的 气 相 色 谱 仪 ， 测 定 氯 霉 素 残 留 量 ， 根 据 保 留 时 间 定 性 ． 用 外 标 法 定 量 ． 4试剂与材料 4.1水：符合GB/T 6682中一级纯水的要求． 4.2．乙 酸 乙rd：色 谱 纯 ． 4.3．甲 醇 ： 色 谱 纯 ． 4.4‘正 己 烷 ： 色 谱 纯 ． 4.5无 水 硫 酸 钠 ：分 析 纯 ．650℃灼 烧4h ， 冷 却 后 贮 于 密 闭 容 器 中 备 用 。 4.6 JE化钠：优级纯． 4.7 .4%SL化 钠 溶 液 ：称 取D化 钠20 g．加 水 溶 解 ， 稀 释 到500 aL ， 摇 匀 ． 4.8 k霉素标准品：纯度>,99.5%. 4.9标准贮备液 　 　 准 确 称 取X霉 素 标 准 品0.0250g （ 准 确 至0. 1 mg)， 在 室 温 下 用 甲1711溶 解 后 ， 转 入 容 盆 瓶 定 容 至 50 nL ， 摇 匀 ， 配 成 浓 度 为 500 l+g/aL的 标 准 贮 备 液 ， W 2t--8℃冰 箱 中 可 保 存 三 个 月 。 4.10标准中间液 　 　 在 室 温 下 取 贮 备 液 1. 00 EL入 50 aL容R瓶 ， 用 甲 醇 稀 释 定 容 至 刻 度 ． 摇 匀 ． 配 成 浓 度 为 10.01*g/aL 的 标 准 中 间 液 ， 置2tC -8℃冰 箱 中 保 存 可 保 存 半 个 月 ． 4.11标准使用液 　 　 临 用 当 天 ， 在 室 温 下 取 中 间 液 适 量 ， 用 甲 醇 稀 释 成 适 当 浓 度 的 系 列 标 准 工 作 液 ． 4.12衍 生 化 试 剂 ：N, 0一 双 （ 三 甲 基 硅 烷 基 ） 三 氛 乙 酰 胺 (BSTFA)／三 甲 基 x硅 烷 《 TMCS ） 体 积 比 99十 1. 5仪器及设备 　 　 实 验 室 常 规 仪 器 、 设 备 及 下 列 各 项 ： 5．1气 相 色 谱 仪 ：配 ‘ 'Ni电 子 捕 获 检 测 器 。 5.2自动进样器a [第4页] DB44/T 543-2008 5.3电子天乎：感置分别为0.0 001 g和0.01 g. 5.4离心机． 5.5旋涡混合器． 5.6旋转蒸发浓缩器 。 5.7真空泵 。 5．8氮 吹 仪 配 砂 浴 锅 ． 5.9超声振荡器 5.10匀浆机． 5.11鸡 心 瓶 ｛50 ML ， 细 口 ， 具 塞 。 5.12具塞玻璃圆底离心管：5 mL. 10 sL和50 aL. 5.13内底有凹糟的厚底进样瓶． 5.14无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠5 g. 6仪 器 条 件 6.1色谱柱：石英毛细管柱， 固定相为聚甲基苯基乙烯基硅氧烷， 规格30 mxO.32 mmxO.25 gm. 6.2检测器：6Ni电子捕获检测器． 6.3检 测 器 温 度 ：300t. 6.4进样口温度：2601C. 6.5进样方式及进样a：不分流方式进样， 1卜 L. 6.6载气：高纯氮气（ 99.999%)， 线速度29 cm/s. 6.7吹扫气：高纯氮气（ 99.999%)， 流it 40 mL/min. 6.8升7s程序：初始柱温2001， 维持1 min ， 以20tChmin速度升至250'C ， 维持12 min ， 再以151C/min 速度升至28010， 维持5 min. 7测定步 。 7．1样 品 预 处 理 　 　 将 水 产 种 苗 用 不 锈 钢 剪 刀 剪 碎 ， 混 合 均 匀 ， 待 测 或 放 置 冰 箱 中 冷 藏 备 用 ． 7.2提取 　 　 从 待 测 样 品 中 称 取 试 样 1g （ 精 确 到 0.018).于 10mL玻AN离 心 管 中 ， 加 入 乙 酸 乙 05 mL ， 超 声 振 荡 10 min, 4000r/min离 心 3 min ， 将 乙 酸 乙 酯 层 转 移 到 50 ML细 口 鸡 心 瓶 中 ．再 重 复 提 取 一 次 ， 合 并 两 次 提 取 液 于 50 mL鸡 心 瓶 中 ．于 40℃水 浴 中 减 压 旋 转 蒸 发 至 干 ． 同 步 进 行 空 白 测 定 。 7.3脱脂 　 　 向 鸡 心 瓶 中 加 500 μ L甲 醉 ， 旋 涡 混 合 ， 溶 解 残 留 物 并 转 移 到 50 mL离 心 管 中 ， 用 4%K化 钠 溶 液 分 五 次 每 次 3 sL洗 涤 鸡 心 瓶 ， 合 并 洗 涤 液 于 离 心 管 ． 向 离 心 管 中 加 入lO sL正 己 烷 ．加 盖 振 荡 2 sin ， 以 4 000 r/yin的 速 度 离 心 2 min ， 吸 除 上 层 正 己 烷 相 ． 7.4反萃取和脱水 　 　 向 7.3步 骤 的 下 层 水 相 加 入 乙 酸 乙ffAIO mL ， 每 次 盖 塞 振 摇 混 合 3 min, 4 000 r/min离 心 3 min．用 无 水 玻 璃 吸 管 吸 取 上 层 乙 酸 乙 酯 相 入 另 一 50 mL鸡 心 瓶 ， 重 复 反 萃 取 一 次 ， 合 并 乙 酸 乙 酯 相 ， 40℃水 浴 减 压 旋 转 蒸 发 至 近 干 ． 用l aL乙 酸 乙 酯 冲 洗 鸡 心 瓶 内 壁 ．重 复 五 次 ， 每 次 冲 洗 液 都 过 无 水 硫 酸 钠 柱 脱 水 。 用 乙 酸 乙 酯 洗 涤 无 水 硫 酸 钠 柱 ， 收 集t a液 入 5 mL其 塞 圆 底 离 心 管 ， 至 大 约 4mL刻 度 ， 于 50tC-55℃的 砂 浴 氮 气 吹 干 ． 加1 sL乙 酸 乙 酯 淋 洗 离 心 管 内 壁 ， 50'0 -55℃砂 浴 氮 吹 至 干 ． 7.5衍生化 7.5.1试样的衍生化 　 　 在 干 燥 的 实 验 室 ． 迅 速 加 入 100pL衍 生 化 试 剂 ， 盖 紧 塞 子 井 旋 涡 混 合 60s,W 70℃烘 箱 中 反 应 30 vin. [第5页] 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 DB44/T 543-2008 50'C-55℃砂 浴A吹 除 去 剩 余 的 衍 生 化 试 剂 ， 至 样 品 管 刚 好 吹 干 为 止 ， 最 后 加 入100 μ L正 己 烷 ， 盖 紧 塞 子 并 旋 涡 混 合 加s． 7.5.2标准液的衍生化 　 　 分 别 取 适 量 标 准 系 列 工 作 液 于 5LL具 塞 圆 底 离 心 管 中 ， 在 50CC-55CCj(吹 至 干 ， 然 后 按 上 述 步 骤 进 行 衍 生 化 ． 氮 吹 和 衍 生 化 操 作 的 注 意 事 项 见 附 录A. 7.6样品测定 　 　 在 上 述 气 相 色 谱 条 件 下 ， 分 别 注 入 试 样 衍 生 化 溶 液 、 氯 霉 素 标 准 衍 生 化 溶 液 ， 记 录 峰 面 积 或 峰 高 ， 响 应 值 均 应 在 仪 器 检 测 的 线 性 范 围 内 。 根 据 色 谱 峰 的 保 留 时 间 定 性 ， 用 外 标 峰 面 积 法 或 外 标 蜂 高 法 定 最 ． 氯 霉 素 标 准 物 质 衍 生 物 气 相 色 谱 图 见 附 录B. 7.7计算 　 　 试 样 中 抓 霉 素 含 量 按 （ 1） 式 计 算 ． 计 算 结 果 需 扣 除 空 白 值 ． 　　　　　X＝ AxCd xV ........................................................................(1) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 凡x7’： 　 　 式 中 ： 　 　 　t一 试 样 中 氯 霉 素 含 量 ， 单 位 为 徼 克 每 千 克 （ Ng/kg ); 　 　 　 才 一 试 样 衍 生 化 溶 液 中 氛 霉 紊 的 峰 面 积 或 峰 高 ｛ 　 　 　ca一 标 准 衍 生 化 溶 液 中 氯 霉9浓 度 ， 单 位 为 纳 克 每 毫 升 （ ng/aL ) 　 　 　y一 试 样 衍 生 化 溶 液 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ 。 IJ） 番 　 　 　 才 8一 标 准 衍 生 化 溶 液 中 氯 霉 素 的 蜂 面 积 或 峰 高 ， 单 位 为 赫 兹 ？ 秒 或 赫 兹 （ Hz - s或Hz ） ； 　　　口一试样质最 ， 单位为克 《 g ). 8方法回收率 　 　 标准 添加 浓度 为1.00 μ g/kg^-10.0 pg/kg时 ， 回收 率为70%-120%. 9方法检测限 　 　 本 方 法 检 测 限 ：0.3 μ g/kg. 10允许差 　 　 两 次 平 行 测 定 结 果 相 对 偏 差<15%. 11方法的线性范围 　 　 本 方 法 的 线 性 范 围 ： 标 准 衍 生 物 溶 液 相 当 氮 霉r浓 度 为0.5 ng/iL^-200 ng//L. [第6页] DB44/t 543-2008 附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 操 作 注 意 事 项 第 一 ， 7.2至7.5步 骤 中 吹 干 时 间 过 长 会 损 失 分 析 物 ， 故 应 密 切 观 察 ， 刚 吹 干 即 可 。 第 二 ， 7.5步 骤 中 衍 生 化 试 剂 如 果 没 有 吹 千 ， 则 气 相 色 谱 图 上 会 出 现 其 杂 峰 ， 并 使 氯 霉 素 峰 的 对 称 性 变 差 和 信 号 值 降 低 ． 　 　 第 三 ， 衍 生 化 操 作 环 境 要 保 持 干 燥 ， 加 衍 生 化 试 剂 要 迅 速 ． 因 衍 生 化 试 剂 遇 水 易 分 解 失 效 ． 附 录 B 　 　 　 　 　 （ 资 料 性 附 录 ） 氯霉素标准物质衍生物气相色谱图 　电 ’翻 图B.1氯霉素标准物质衍生物气相色谱图