DB44/T 540-2008 水产种苗中呋喃唑酮残留量的测定 ——液相色谱法 Determination of furazolidone residues in fishery seedling by high performance liquid chromatography

本标准规定了水产种苗中呋喃唑酮残留量的测定方法一液相色谱法。
本标准适用于水产种苗中呋喃唑酮残留量的测定。？[第1页] ICS 67.050 B 50号 DB44 广 东 省 地 方 标 准 DB44/T 540-2008 水产种苗中呋喃唑酮残留量的测定 　　　　— —液相色谱法 Determination of furazolidone residues in fishery seedling by high performance liquid chromatography 2008-07-11发 布 2008-10-01实 施 广 东 省 质 量 技 术1监 督 局 发 布 [第2页] DB44/T 540-2008 刖 舀 本 标 准 的 附 录A为 资 料 性 附 录 ． 本 标 准 由 广 东 省 海 洋 与 渔 业 局 提 出 。 本 标 准 由 中 国 水 产 科 学 研 究 院 南 海 水 产 研 究 所 质 量 与 标 准 化 技 术 研 究 中 心 归 口 ． 本 标 准 起 草 单 位 ： 农 业 部 渔 业 环 境 及 水 产 品 质 量 监 督 检 验 测 试 中 心 （ 广 州 ） ． 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 黄 珂 、 陈 培 基 、 林 钦 、 李 刘 冬 、 黎 智 广 、 王 增 焕 、 甘 居 利 ． [第3页] DB44/T 540-2008 水 产 种 苗 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 的 测 定 — — 液 相 色 谱 法 范 围 本 标 准 规 定 了 水 产 种 苗 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 的 测 定 方 法 一 液 相 色 谱 法 ． 本 标 准 适 用 于 水 产 种 苗 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 的 测 定 ． 2规范性引用文件 　 　 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 ． 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 ． 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 ． 　 　GB/T 6682分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 3原理 　 　 样 品 中 呋 喃 唑 酮 用 二 氯 甲 烷 提 取 ， 无 水 硫 酸 钠 去 除 水 分 ， 燕 发 浓 缩 提 取 液 ， 用 正 己 烷 液 一 液 萃 取 除 去 脂 肪 及 其 他 杂 质 ， 离 心 ， 取 下 层 清 液 经 膜 过 滤 器 后 ， 用 反 相 色 谱 柱 分 离 ， 紫 外 检 测 器 检 测 ， 外 标 法 定 量 ． 4试剂和材料 　 　 除 另 有 规 定 外 ， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 ． 试ft用 水 应 符 合GB/T 6682规 定 的 一 级 水 ． 4. 1 PA喃 唑 酮 标 准 品 ：纯 度X99.5%. 4.2乙ri：色谱纯． 4.3二A甲烷。 4.4正己烷：用乙腈饱和． 4.5 85％磷酸 。 4.6无水硫酸钠：经640℃灼烧4h后 ， 贮于密闭容Is中备用． 4.7乙Ed水溶液：乙腈十水＝80十20. 4.8呋 喃 唑 酮 标 准r-备 液 ； 称 取10.0 mg呋 喃 唑 酮 标 准 品 ．用 乙i1水 溶 液 溶 解 并 稀 释 定 容 至50皿L棕 色 容It瓶 中 ， 在 冰 箱 中 冷 藏 保 存 ， 保 存 期 一 个 月 ． 该 液 1 mL相 当 于 200 μ g呋 喃P-t酮 ． 4.9呋 喃PI酮 标 准 工 作 液 ：临 用 前 ， 取 呋 喃 唑 酮 标 准 贮 备 液 ， 用 流 动 相 稀 释 成 浓 度 为0. 002 lig/nL^- 1.00 lig/dL的 标 准 工 作 液 。 5仪器和设备 5.1液相色谱仪 ， 配有紫外检测器． 5.2分析天平：感量0.0 001 g. 5.3天平：感量0.01 g. 5.4高速组织捣碎机． 5.5旋转蒸发仪． 5.6离心机。 5.7振荡器． 5.8梨形瓶 ， 具塞 。 [第4页] DB44/T 540-2008 5.9离心管 （ 100 mL) 5.10离心管 （ 5.0 mL) 5.11膜 孔 滤 器 （ 0.45 Pm) . 6操作步骤 6.1样品制备 　 　 贝 苗 等 有 壳 种 苗 去 壳 ， 取 肌 肉 和 体 液 ； 鱼 苗 、 虾 苗 可 直 接 制 样 ． 样 品 切 成 小 块 后 在 研 钵 或 高 速 组 织 捣 碎 机 中 匀 浆 ， 充 分 混 匀 。 6.2提取 　 　 称 取6. 1试 样2g （ 精 确 到0.01 g)， 置 于100 ML离 心 管 中 ， 向 管 中 加20 mL二 氯 甲 烷 ， 搅 拌 分 散 后 浸 泡15 min ， 在 振 荡 器 上 振 荡10 min后 ， 向 离 心 管 中 加10 g无 水 硫 酸 钠 ．再 振 荡10 min, 4 000 r/min 离 心 10皿in ， 上 清 液 转 移 至 梨 形 瓶 中 ， 残 渣 用 15 mL二 氯 甲 烷 按 上 述 方 法 提 取 两 次 ， 合 并 上 清 液 于 同 一 梨 形 瓶 中 ， 于 旋 转 蒸 发 仪 上 在 45℃左 右 水 浴 下 减 压 蒸 发 去 除 溶 剂 ， 蒸 发 速 度 控 制 在 每 秒 一 滴 。 6.3净化 　 　 用 1.0皿L流 动 相 和 2.0mL正 己 烷 溶 解 6.2中 提 取 物 并 充 分 洗 涤 梨 形 瓶 ， 将 液 体 移 人 5.0mL离 心 管 中 ， 在 4 000 r/m i n离 心 5 min ， 用 尖 嘴 吸 管 移 去 上 层 正 己 烷 层 ， 再 向 离 心 管 中 加 入 2.0ML正 己 烷 ， 混 匀 1 min, 离 心 ， 用 尖 嘴 吸 管 移 去 正 已 烷 层 ， 下 层 清 液 经0.45皿 膜 孔 滤 器 过 滤 后 供I.￡ 分 析 ． 6.4测定 6.4. 1色谱条件 6.4.2色 谱 柱 ：Ca‘柱 ， 250 mmX4.6 mm(id)， 粒 度5 Pm. 6.4. 3流 动 相 ：乙U Y-11十 水 十 磷 酸 ＝40十 60十 0.1. 6.4.4流速：0.8 %L/min. 6.4.5检测波长：365 nm. 6.4.6柱温：室温． 6.4.7进样量：50 W .,. 6.5色谱分析 　 　 根 据 样 品 液 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 情 况 ， 选 定 峰 面 积 相 近 的 标 准 工 作 溶 液 。 标 准 工 作 溶 液 和 样 品 液 中 呋 喃 唑 酮 响 应 值 均 应 在 仪 器 检 测 线 性 范 围 内 。 对 标 准 工 作 溶 液 和 样 品 液 等 体 积 参 插 进 样 进 行 测 定 。 在 上 述 色 谱 条 件 下 ， PA喃pt酮 保 留 时 间 约 为 6 min 。 标 准 品 色 谱 图 参 见 附 录A图A. 1. 7结果计算与表述 　 　 根 据 标 准 工 作 液 和 样 品 液 的 峰 面 积 ， 按 公 式 （ 1） 计 算 样 品 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 。 X ＝鱼 上 里 上 r二 999？？ 。 ． 。 。 一 。 ............................................ (1) 　 　 　 　 　 应 ．xm 式 中 ： 　 　X—样 品 中 呋 喃 唑 酮 残 留 量 ， 单 位 为 微 克 每 千 克 （ pg/kg); 　 　 才 — — 样 品 液 中 呋 喃 唑 酮 的 峰 面 积 ； 　 　 几 — — 标 准 工 作 溶 液 中 呋 喃 唑 酮 的 峰 面 积 ； 　 　C4 -—标 准 工 作 溶 液 中 呋 喃 唑 酮 的 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升(μ g/mL); 　 　 犷 — — 样 品 液 最 终 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ 。L ） ； 　 　 刃 — — 样 品 的 称 取 量 ， 单 位 为 克 （ g) 8线性范围、 检测限、 回收率 [第5页] DB44/T 540-2008 8. 1线性范围 　 　 本 方 法 的 呋 喃 唑 酮 标 准 工 作 液 线 性 范 围 为 0.002 pg/mL-r 1.00 pg/mL. 8.2检测限 　 　 本 方 法 的 检 测 限 为2 pg/kg. 8.3回收率 　 　 在 样 品 中 添 加 2 μ g/kg^-500 μ g/kg呋 喃PI IN时 ， ． 回 收 率 为 70%-x100%. 8.4 1复性 　 　 本 方 法 的 相 对 标 准 偏 差 ＜15 %. [第6页] DB44/T 540一一2008 附 录 A 　 　 　 （ 资 料 性 附 录 ） 呋喃唑酮标准品的色谱图 DADI A. Sig=385.4 Rot-off 图A.1 AA喃31酮标准品的色谱图