【干货】溶剂效应实战case-study

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以下文章来源于研发分析之路  

NO.1

问题描述

在检测某化合物纯度时，样品纯度较低（仅 80% ）， RT=2.6min 杂质过大（ 16.203% ），峰形也明显不正常，为肩峰。

原方法条件

NO.2

方法优化

该样品配样方式： 0.5mg/mL ， 50%ACN 稀释，进 5ul 。对比技术包，发现稀释剂应该用 ACN 。将样品严格按照技术包（  0.5mg/mL ， ACN 稀释，进 5uL ）配制进样，结果发现峰高过载（杂质检测结果失真）。调整进样量为 2uL  ，重新进样发现 RT=2.6min 杂质变大，由 0.609%→1.947% 。

一开始怀疑是由于样品不稳定造成的，后将样品先配现进（  0.5mg/mL ， ACN 稀释，进 2uL  ），并且连续进样，发现样品在 ACN 中稳定。结果如图：

杂质裂分成两个明显的峰，且 RT=2.4min+RT=2.6min 杂质大小保持不变，调取 紫外吸收 波长显示两者的紫外吸收基本一致。

  排除样品不稳定因素，初判断为 溶剂效应 。

NO.3

异常解决

1.  降低进样量

调整进样量（ 0.5uL  或 1uL  ），溶剂效应消失。故重新配样（ 1.0mg/mL ， ACN 稀释，进 1uL  ）检测异常样品， RT=2.6min 杂质为 7.581% 。但样品 ACN 稀释溶解度不好，需超声较长时间。

2.  更换稀释剂

50ACN% 稀释进样（  0.5mg/mL ，进 5uL  ）溶剂效应存在，进样量为 2uL 时，溶剂效应消失，但在 50%ACN 中样品发生水解， RT=2.6min 杂质变大（ 16.037% ），用 MeOH 做稀释剂亦是如此。

3.  更换与 流动相 初始比例相近的稀释剂

用 0.1%TFA:ACN=60:40 稀释，进样量 5uL ，未出现溶剂效应， RT=2.6min 杂质为 8.189% ，样品在该溶剂中稳定存在。

方案 3 改成余流动相相近的稀释剂适用于该方法的分析

NO.4

总结

溶剂效应 ：液相反应中，溶剂的物理和化学性质影响反应平衡和反应速度的效应。可能造成色谱峰展宽、分叉、保留时间漂移、 峰面积 变化，双峰等现象。与此同时，较早洗脱的峰出现前沿或分叉，较晚洗脱的峰峰形正常。

产生原因 ：样品进入 高效液相色谱 中，当溶剂与流动相存在差异时，一部分样品溶解进入了流动相，一部分还留在溶剂里造成色谱保留的差异。造成这种差异的原因主要有溶剂强度、进样体积、流动相与溶剂的兼容性、溶剂 pH 等。

进样体积导致的溶剂效应： 使用强度大于该样品出峰时流动相强度的溶剂，增加进样体积后，目标分析物色谱峰会向前迁移，直至裂分，并且峰高变小峰宽变大。这是因为进样体积较小时，扩散至流动相的目标分析物占绝大多数，除了保留时间略微提前，峰形以及峰宽与流动相溶解时基本一致。体积增大到一定程度，扩散至流动相氛围的目标物与留在溶剂氛围的目标物在数量上相当时，色谱峰分叉明显。当样品体积进一步增大，绝大多数目标物进入色谱柱时是溶解在溶剂中的，目标分析物的色谱峰已经明显向前迁移了。

PS ：当出现样品与空白峰叠不上的情况，可以多注意一下，及时发现异常情况。

NO.5

知识拓展

溶剂效应产生过程解析：

第一阶段：样品刚被注入系统，进入色谱柱后，流动相氛围中的目标物以正常速度被洗脱。因强溶剂洗脱，移动速度快。样品在空间上开始慢慢分裂

第二阶段：在一定时间内，溶剂氛围中的目标物移动始终快一些，前后两部分距离扩大。但移动快的目标物所处氛围逐渐被流动相稀释 ( 注：因为溶剂和流动相均不保留 ) ，其移动速度会逐渐降至正常流速。直到前面目标物的氛围完全被流动相替代，前后两部分的距离稳定下来。因而，样品溶剂与流动相洗脱强度差距越大，两部分目标物最终的距离拉的越大。

第三阶段：所有目标物在色谱柱中正常移动，但分裂已不可逆转

经过检测器，同一目标物给出了两个色谱峰。其中进柱前即扩散进入流动相的那部分目标物组成了后面的色谱峰，它的保留时间与目标物的真实保留时间基本吻合。

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药品研发/QC实验室质量体系管理构建专题研讨班

时间： 12月14日-16日

地点：苏州市

课程概述

       药品研发注册质量控制实验室的主要功能是药品研究者在药品研发、注册过程中对注册工艺、物料、中间产品、产品的符合指导原则、药典标准质量控制检验检测活动提供注册支持。QC实验室通常在不同注册阶段完成的工作需求不同，通常包括：对注册用工艺物料、实验用药、中间产品、临床药品、药物活性成分（APIs）、药用辅料、直接接触药品的包装材料及容器进行按照约定的规范取样，检验检测、研究和安全性评价工作。由于 QC 实验室承担承担研发产品的质量研究，需要严格规范的质量管理体系支持，在物料检验，过程控制检验，工厂环境监测，注册需要的质量验证检验放行的重要工作。需要基于实验室质量管理体系并结合产品特点，进行研发项目组织管理。为此，我们定于2023年12月14-16日在苏州举办“药品研发/QC实验室质量体系管理构建专题研讨班”

课程时间安排

12月15日

9:00-12:00    13:30-16:30

一．药品研发 / QC 实验室质量体系管理构建

1.2010 版 GMP 附录《临床试验用药品（试行）》对实验室质量体系管理要求

2.GMP 指南（第 2 版） 对 实验室质量体系的管理要求

3. 依据研发注册不同阶段的注册检验流程构建不同要求的体系

4. 研发实验室重点管理文件案例

5. 临床注册阶段实验室管理文件案例

二． 药品研发 / QC 实验室检测数据评价与样品质量放行管理

1. 研发实验室检测与放行

2. 关键物料检测与放行

3.IND 注册申报批次检测与放行

4. 非关键临床批次的检测与放行

5. 关键临床注册批次的检测与放行

三． 药品 研发 / QC 实验室管理合规性内审

1. 研发与 QC 实验室合规检查相同点与不同点

2. 研发与 QC 实验室功能性合规风险控制与检查

3. 稳定性实验室偏差控制管理与检查

ü a 偏差调查与 OOS 调查及 CAPA 管理的切入时机

ü b 注册质量状态管理合规评价

4. 研发实验室检测方法学转移流程与合规检查

主讲人：刘老师   某大型医疗机构质量总裁   NMPA 高研院特聘讲师，医药工程高级工程师， 30 余年药品管理经验，现从事药物研发、注册的体系构建与监管。

11月12日

9:00-12:00    13:30-16:30

符合药典规定要求的实验室质量体系的规范化管理

1. 实验室质量管理法规体系概述

2. 如何学习、了解和熟悉药典分析方法，提高业务人员科技水平？

3. 实验室 质量管理体系要求的关键管理程序

1) 取样的风险控制点（环境、工具、交叉污染）

2) 样品管理（法规、转运和接受、储存与发放）

3) 基于风险评价分析仪器分类管理与生命周期管理

（分析仪器分类、编号管理、校验与维护）

4) 试剂 / 试液 / 指示剂 / 储备液 / 流动相等如何管理 / 如何研究和制定有效期

药品 质量标准的制定、起草与修订

一、 药品 质量标准 规范化建立过程

二、性状、理化常数的制订与鉴别项的规定及纯度检查；

三、 如何 确定 质量标准项目及限度

举例说明： ①原料药的进厂检验标准的制定；

②进口药品注册标准的起草；③放行标准与货架期标准的比较等 ：

四、质量标准修订的必要性与一般原则

主讲人：张老师   北京市药品审评专家，北京药监局新药研制现场核查专家，NMPA 高级研修学院客座讲师。在北京市药品检验所任职近30年，主要负责药典标准的起草和复核、国内新药的审批以及进口药品的质量标准复核工作，具有丰富的实验室实际工作经验。

会务费

会务费： 3500 元 / 单位，每单位限额 3 人，包含 ( 专家费、资料费、场地费、现场问答等 ) 。食宿统一安排，费用自理。

培训报名联系人 ： 王老师 

微信/手机：15506140531（微信同号）

报名参加此培训课程单位赠送 中国药典格式质量标准撰写实操及案例分析课程 （共计 6课时）

一、 《 质量标准通用格式和撰写指南 》 (2021 第 32 号 ) 解读

二、中国药典格式的质量标准的主要内容

1. 体例格式要求（编排顺序、段落、字体、行间距等方面的要求）

2. 符合“凡例”规定的文字术语、计量单位和数字符号

3. 检测方法叙述注意事项举例说明及与试验方案在行文表述上的区别

三、中国药典格式质量标准撰写要求详解

1. 药品名称、结构式、分子式与分子量的格式要求

2. 化学命名的要求与常见错误

3. 含量（或效价）的限度规定规范书写要求

4. 如何撰写药品的性状要求，包括外观、臭、味以及物理常数等；

5. 色谱法、光谱法等鉴别试验撰写的要点分析

6. 有关物质与残留溶剂检测项溶液制备、色谱条件、系统适用性要求、测定法、限度撰写要求与常见错误分析；不同计算方法的表述差异对比

7.AAS 法检测元素杂质检测项撰写要求

8. 溶出度、含量均匀度项下检测方法与含量测定一致或不一致的撰写对比分析

9. 微生物限度、内毒素、无菌等生物安全性检测项撰写要素分析

10. 容量法、色谱法、效价等不同检测技术的含量测定撰写对比分析

11. 纯度测定与纯度项规范撰写要求

12. 类别、规格、贮藏、有效期的规范格式与常见错误分析

三、质量标准起草说明包括哪些内容及注意事项

会议培训汇总

地点	时间	会议主题（如需了解详情请点击文字链接查看）
线上	11 月28-29日	【线上】 制药高活性产品共线的风险挑战及关键要点案例分析
南京	11 月30-12月2日	【南京】 立项信息解读和科研成果转化
长沙	12 月07-09日	【长沙 】新药研发项目经理十项核心技能进阶
南京	12 月07-09日	【南京】 加强MAH生产监管及现场检查应对策略
苏州	12 月14-16日	【苏州】药品研发/QC实验室质量体系管理构建
线上	12 月21-23日	【线上】B证许可持有人（MAH）重点实操流程及210项省局现场检查缺陷项解读
上海	12 月22-24日	【上海】小分子创新药研发中全新质量标准的建立实操演练
杭州	12 月22-24日	【杭州】包材供应商质量管控及关联审评策略
南京	12 月22-24日	【南京】 新药研发项目风险与问题全流程管理实操演练
线上	12 月23-24日	【线上】 药品全生命周期的质量风险管理

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培训报名负责人：王老师

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