乌芍止痒颗粒提取工艺、浓缩工艺及干燥工艺研究

16中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(l)炮制制乌芍止痒颗粒提取工艺、浓缩工艺及干燥工艺研究郭志烨,杨明,韩丽,刘李梅,梅明,邹文铨3摘要]目的:优选中药复方制剂乌芍止痒顆粒的提取工艺、浓缩工艺、干燥工艺。方法:采用正交试验法,以二苯乙烯苷、梣桐的含量以及干膏得率作为评价指标,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素,并结合综合评分的方法优选出乌芍止痒顆粒的提取工艺。以二笨辶烯苷、梣桐的含量作为评价指标,对常用的浓缩方法、干燥方法进行比较,优选出乌芍止痒颗粒的浓缩工艺、干燥工艺。结果:最佳提取工艺为加12倍量60%的乙醇,回流提取3次,每次Ih;最佳浓缩工艺为减压浓缩(温度60℃,真空度008~0.09MPa);最佳千燥工艺为减压干燥(温度60℃,真空度008-009MPa)。结论:优选出的乌芍止痒颗粒的提取工艺、浓縮工艺、干燥工艺稳定可行、科学合理,可用于工业化大生产[关键词]制何首乌;白鲜皮;正交试验;提取工艺;浓缩工艺;干燥工艺[中图分类号]R283文献标识码]A[文章编号]1674926X(2015)01-00404Research of extraction technology, concentration technology and drying technology of Wuyao Zhiyang granules/GUO Zhi-ye, YANG Ming",HAN Li, LIU Li-mei, MEI Ming, ZHOU Wen-quan (l. Pharmacy College, Chengdu Universityof Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province-KeyLaboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan; 2. Key Laboratory of ModernPreparation of TCM, Ministry of Education, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang, Jiangxi 330004Jiangxi; 3. Sichuan University, Chengdu, Sichuan 610064, China)[Abstract] Objective: To optimize the extraction technology, concentration technology and drying technology of WuyaoZhiyang Granules. Method: The orthogonal test was used. Stilbene glucoside content, fraxinellone content and dry extract yieldwere used as indexes to optimize ethanol concentration, ethanol volume, extraction time and times. and comprehensive evaluatiowas used to optimize the extraction process of Wuyao Zhiyang Granules. the contents of stilbene glucoside and fraxinellone wereused as indexes for optimizing the concentration technology and drying technology of Wuyao Zhiyang Granules.Result: Theoptimal ethanol extraction technology was adding 12 times of 60% ethanol for 3 times and extracting for Ih each time. The optimconcentration technology and drying technology was vacuum concentration and vacuum drying with temperature of 60"C andacuum of 0.08-0.09MPa, Conclusion: The optimized extraction technology, concentration technology and drying technologyre stable, feasible, scientific, reasonable and suitable for production[Key words] Prepared Heshouwu; Baixianpi; orthogonal test; extraction technology; concentration technology; dryingechnology[基金项目四川省科技支撑项目(2014S20071-09)鸟芍止痒颗粒是由制何首乌、白鲜皮等多种中[作者单位]1成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验药组成,具有滋阴润燥,养血祛风的功效,主治血室——省部共建国家重点实验室培育基地,四虚型老年皮肤瘙痒症。制何首乌补肝肾,益精血,养川成都611372江西中医药大学现代中药制血滋阴,为滋补良药,重用制何首乌以治其本,寓剂教育部重点实验室,江西南昌330004;3四川大学,四川成都610064治风先治血”之意,实为君药。白鲜皮清热解毒兼作者简介郭志烨(1988,女(汉族),药剂学硕士,从事中药以祛湿杀虫,祛风止痒,实为臣药。现代药理研究新技术、新工艺、新制剂研究表明何首乌中的主要有效成分二苯乙烯苷是一种较Tel(028)61800127Emailguozhiyejiayou@163.com强的抗氧化剂,能起到抗衰老、提高免疫功能、防[通讯作者]杨明,男,教授,博士生导师,从事中药新剂型与新技术、中药复方释药系统研究治动脉硬化TV中国煤化立乌功效十分吻Te(0791)711658 Email: yangming 16@26com合2,同时CNMHG征性成分,能韩丽,女,教授,硕士生导师,从事中药新技排除复方中其他成分十扰且含量较高。现代药理研术、新工艺、新制剂研究Tel:(02861800127Email:hanliyx@163.com究表明白鲜皮中的主要有效成分梣桐是一种较强的收稿日期]20140613中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(1)抗炎剂,能起到保肝、杀虫、抑菌、止痒等作用,度与峰面积呈良好的线性关系与白鲜皮功效十分吻合;同时梣桐是白鲜皮特征2.1.4供试品溶液制备称取2个处方量药材,加入6性成分,能排除复方中其他成分干扰且含量较高。倍量60%乙醇回流提取3次,每次lh,过滤,合并提干膏得率是固体复方制剂剂型选择的主要依据。故取液,精密移取2mL,加60%乙醇稀释并定容至10本课题以二苯乙烯苷、梣桐的含量和干膏得率作为mL棕色容量瓶中,摇匀,取上清液过0.45μm微孔滤评价指标,用正交试验法优选制何首乌、白鲜皮等膜,取续滤液即得。的乙醇回流提取工艺,并以二苯乙烯苷、梣桐的含2.1.5阴性对照溶液的制备按处方比例称取除制何量和转移率为评价指标,优选复方提取液的浓缩、首乌外的其余药材,按照“2.14”项下制备阴性对照干燥工艺,使各工艺稳定可行、科学合理,并适用溶液。于工业化大生产,从而更好的控制乌芍止痒颗粒的2.1.6专属性试验按照“2.11项下方法,分别精密质量,保证其疗效。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各101仪器与试药μL进样分析。发现在二苯乙烯苷对照品出峰的位置上,阴性对照溶液无相应色谱峰出现,说明样品中仪器: Agilent1260LC高效液相色谱仪(美其他成分对二苯乙烯苷的含量测定不产生干扰,试国安捷伦公司);BP211D电子分析天平(德国验结果见图1。sartorius);电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司);RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣有限公司);SHHX恒温循环烘干箱(上海苏昊电器有限公司);DZF6030真空干燥箱(上海风棱实验设备有限公司)试药:二苯乙烯苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110844201109);梣桐对照品(中国药品生物制品检定所,批号:11000602);HPLC分析用乙腈、甲醇为色谱纯(上海安谱科学仪器有限公司);超纯水( Millipore超纯水净化系统制图1对照品溶液(A)、复方供试品溶液(B)及阴性对照溶液得);乙醇为分析纯(成都市科伦化工试剂厂)。(C)的HPLC色谱图(1二苯乙烯苷)2方法与结果21.7精密度试验分别精密吸取二苯乙烯苷对照品21二苯乙烯苷含量测定方法溶液10μL,连续进样6次,记录峰面积值,计算二苯2.1.1色谱条件色谱柱为 Kromasil100-5Cs柱<烯苷峰面积RSD为0.26%,说明仪器精密度良好。2.1.8稳定性试验取同一供试品溶液于室温下放(250*46mm,5μm);流动相为乙腈-水(25:75,置,于0,2,4,6,8,10h分别进样10μ,记录峰vv);检测波长为320nm;柱温为30℃;进样量为10uL1面积值,结果二苯乙烯苷峰面积RSD为0.90%,说明21.2对照品溶液制备精密称取二苯乙烯苷对照品样品溶液在10h内稳定性良好。适量置50mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻2.1.9重复性试验称取1个处方量药材6份,按照度,摇匀,即得浓度为01040mgmL的对照品母2.14项下方法制备供试品溶液,记录峰面积值,液。计算二苯乙烯苷的含量,结果RSD为1.73%,说明该2.1.3线性关系考察分别精密量取1、2、3、4、5、方法重复性良好。6mL对照品母液置10mL棕色容量瓶中,加甲醇稀释2.1.10加样回收试验称取0.5个处方量药材6份,分并定容至刻度,摇匀。分别精密吸取10μ按“2.1.1别加入二苯乙烯苷对照品,按样品溶液制备方法处项下HPLC条件,进样分析。以对照品浓度(X)对理,进行质中国煤化工收率,结果二峰面积(Y)作图,得到标准曲线图。其回归方程苯乙烯苷平CNMHG168%,说明该为:Y=24.3000X+52330,r=0.9999,n=6。说明在方法准确度良好。1040~96240ugmL范围内,二苯乙烯苷对照品浓22梣桐含量测定方法2.2.1色谱条件色谱柱为 Kromasil100-5C1柱18·中药与临床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica205.6()(250*46mm,5μm);流动相为甲醇-水(60:40,面积值,结果梣桐峰面积RSD为0.31%,说明样品溶v/v);检测波长为236nm;柱温为30℃;进样量为液在10h内稳定性良好。2.2.9重复性试验称取1个处方量药材6份,按照2.2.2对照品溶液制备精密称取梣桐对照品适量“2.2.4”项下方法制备供试品溶液,记录峰面积值置100mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇计算梣桐的含量,结果RSD为198%,说明该方法重匀,即得浓度为00615mgmL的对照品母液。复性良好。2.2.3线性关系考察分别精密量取1、2、3、4、5、2.2.10加样回收试验称取0.5个处方量药材6份,分6mL对照品母液置l0mL容量瓶中,加甲醇稀释并别加入二苯乙烯苷对照品,按样品溶液制备方法处定容至刻度,摇匀。分别精密吸取10μL按“2.2.1”理,进行质量浓度测定,计算加样回收率,结果梣项下HPLC条件,进样分析。以对照品浓度(X)对桐平均回收率1017%,RSD为1.3%,说明该方法准峰面积(Y)作图,得到标准曲线图。其回归方程确度良好。为:Y=15.5415X+1.1200,r=0.9997,n=6。说明在2.3醇提工艺考察6.15~36.90μgmL范围内,梣桐对照品浓度与峰面2.31浸泡时间及吸液率的考察按处方比例称取药积呈良好的线性关系。材共50g,加入500mL的60%乙醇,浸至药材全部透2.24供试品溶液制备称取2个处方量药材,加入6心(计时约为60min,滤过,收集滤液,计算药材的倍量60%乙醇回流提取3次,每次1h,过滤,合并提吸液率为114%mlg),因此确定在首次提取时应多加取液,精密移取5mL,加60%乙醇稀释并定容至101倍量的溶剂,浸泡60min后开始提取。mL容量瓶中,摇匀,取上清液过045μm微孔滤膜,232提取正交试验设计乌芍止痒颗粒中制何首乌取续滤液即得。的主要药效成分是二苯乙烯苷、蒽醌等,白鲜皮主22.5阴性对照溶液的制备按处方比例称取除白鲜要药效成分是白藓碱、梣桐、黄柏酮等,经查阅文皮外的其余药材,按照“2,2.4”项下制备阴性对照溶献和预试验,依据其主要药效成分的理化性质,采液用一定浓度的乙醇回流提取。按照处方比例称取9份2.2.6专属性试验按照¨2.1.1ν项下方法,分别精密药材,对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10数四个因素进行L(3)正交试验,制备样品溶液,因μ进样分析,发现在梣桐对照品出峰的位置上,阴素水平见表1。性对照溶液无相应色谱峰出现,说明样品中其他成表1因素与水平表分对梣桐的含量测定不产生干扰,试验结果见图2。水平A乙醇浓度B溶剂用量C提取时间D提取次数(倍)0.5A102.3.3样品含量测定按L4(3)正交表进行试验,分别精密移取“2.3.2项下各提取液适量,置10mL容量瓶B中,加60%乙醇至刻度,摇匀,即得供“二苯乙烯苷含量测定”、“梣桐含量测定”的样品溶液。101214161820234干膏收率测定按L(3)正交表进行试验,分别U/min量取提取液适量,置已干燥至恒重的蒸发皿中,水图2对照品溶液A、复方供试品溶液B及阴性对照溶液浴浓缩至干,置105℃烘箱中干燥3h,取出,于干燥C的HPLC色谱图(1梣桐器中冷却30min,迅速精密称定其重量,计算干膏得2.27精密度试验分别精密吸取梣桐对照品溶液10率。中国煤化工μ,连续进样6次,记录峰面积值,计算梣桐峰面积2.3.5正交i定二苯乙烯苷CNMHGRSD为0.13%,说明仪器精密度良好。梣桐含量以平旱,丌不用绣亡评分(综合评分228稳定性试验取同一供试品溶液于室温下放〓二苯乙烯苷含量/二苯乙烯苷最高含量×0.45×-100-梣置,于0,2,4,6,8,10h分别进样10μL,记录峰桐含量梣桐最高含量×045×100千膏收率/干青最高中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(1)19收率×0.10×100)进行评价,试验结果见表2、表3。表2正交试验设计及结果(3)因素试验号干膏得率(%)二苯乙烯苷含量(mgg)桦桐含量(mgg)综合评分17.198.82000608325.542.511228.65124180.9612996721281208490.934394640.8628813318.1811.101808724871215.578291216.189.1335091277116808100K25848243.75234.5521526263.09255.17254.982626426391275.54189.46227.445671.474表3综合评分方差分析24浓缩工艺考察方差来源离差平方和自由度均值P值称取20个处方量药材,按确定的提取工艺进89.46294.7316903行提取,提取液分成等量的4份,其中两份采用常50.944671.4742222754725.500压法浓缩;另外两份采用减压法(温度60℃,真空33573724466<0.05度0.08~0.09MPa)浓缩。在浓缩至相对密度约为2744513.72212060℃)时取样检测,结果见表5。注:P<0.05表示有显著性差异,<0.01表示有极显著性差异表5浓缩工艺考察结果从综合评分方差分析结果可看出,提取次数浓缩方法二苯乙烯苷二苯乙烯苷彬桐含量桐转移率D)对干膏得率、二苯乙烯苷和梣桐的提取有含量(mgg)转移率(%)(mgg)c)显著影响,为主要因素;乙醇浓度(A)、提取常压浓缩8338709185时间(C)和溶剂用量(B)对提取的影响不大,减压浓缩1081759421091589630为次要因素,结合直观分析,各因素作用主次为试验结果表明,浓缩方法对提取液中桐含量D>A>C>B,且D2>D2>D1,A2>A1>A3,C3>C2>C1,影响不大,但是对二苯乙烯苷含量影响较大,其中B2>B3>B1。考虑到工业生产成本,综合比较后确定减压浓缩优于常压浓缩,所以综合评价最终采用减最佳醇提工艺为A2B2C2D3,即8倍量60%乙醇,回流压浓缩(温度60℃,真空度0.08-0.09MPa)作为本课提取3次,每次10h。题的浓缩工艺236验证试验根据以上试验结果,对优选出来的最佳25千燥工艺考察提取工艺条件AB2CD2进行验证试验,重复3次,测定称取20个处方量药材,按确定的提取工艺、浓二苯乙烯苷、梣桐的含量以及干膏得率,结果见表4。缩工艺进行提取和浓缩,浓缩液平均分成4份,其表4提取工艺验证结果中两份置于恒温循环烘干箱(温度60℃)中常压干编号二苯乙烯苷含量mgg)梣桐含量(mgg)干膏收率(%)燥,另外两份置于真空干燥箱(温度60℃,真空度11.75500.94080.08~009MPa)中减压干燥,结果见表6。11.73720.9399表6干燥工艺考察结果12.07970.929921.25干燥干燥V凵中国煤化工烯书糊含量铜转均值11.85730.93692141方法时间CNMHG((mg/g)试验结果表明,优选的提取工艺稳定可行,重常压干燥4h青体较硬74968025628808019复性好。减压干燥2体松7241952879080681(下转第24页)中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia medica2015:6(1)[3]国家药典委员会中华人民共和国药典(一部S北京中国临床20134(3:14医药科技出版社,2010:124[9]郑维兵HPLC法测定归芪生血颗粒中阿魏酸的含量门海峡[4]谢玲杨凌红,李晓慧当归药理作用研究进展[门中医药研药学2013,25(08):88究,2000166:56[10]贲永光李坤平李康等正交设计白芍总苷的超声提取工[5]叶娟,高文远刘新桥等白芍配方颗粒制备工艺优化及质量艺门食品与生物技术学报2009,28(4)501控制门中国药房,2007,18(9):660陈象青刘圣方炎等多指标正交优选当归提取工艺[中[6]蒋伟王长虹王铮涛当归提取物的制备工艺及其质量控制国实验方剂学杂志,2010,16(8)25[华西药学杂志2010,25(187[12]呼梅安小梅,卢云正交试验法优选麻桔喘咳口服液的提[7甘井山邹爱英刘莹等,高相液相色谱法测定接骨片中阿魏取工艺[中国医院药学杂志,2014,34(02):113.酸和芍药苷J现代药物与临床,2013,28(3):347(责任编辑:何瑶)[8]王芳郑琰谈静,等调经止痛胶囊提取工艺研究[J中药与(上接第19页)试验结果表明,干燥方法对浓缩液中梣桐含量的速率越快,60℃及以下温度对二苯乙烯苷质量浓影响不大,但是对二苯乙烯苷含量影响较大,其中度影响较小(具体研究内容将另文发表)。故根据减压干燥优于常压干燥。此外减压时间较短,所得上述研究结果在本试验中有关二苯乙烯苷的含量测干燥物的性状较好,所以综合评价最终采用减压干定项均釆用避光操作;提取时对水浴锅温度进行控燥(温度60℃,真空度0.08~0.09MPa)作为本课题的制,使其满足提取溶剂沸腾即可;减压浓缩、减压千燥工艺干燥的温度控制在60℃。33本课题釆用多指标综合评价的方法对复方中药制3小结剂乌芍止痒颗粒的提取工艺、浓缩工艺、干燥工艺31中药复方制剂的制备工艺直接影响制剂质量和临进行考察,优选的工艺稳定可行,为其工业化大生床疗效,因此对中药复方制剂制备工艺的考察极为产奠定了基础。重要。但是中药复方成分复杂,且制剂的疗效是各成分共同发挥作用产生,因此本课题对制备工艺的[参考文献]考察均采用多指标综合评价。提取工艺考察中,[高淑红苏珍枝肖学凤制首乌化学成分及药理作用研究进苯乙烯苷、梣桐均为主要药效成分,因此综合评分展团山西中医学院学报,2012,13(2)14权重系数设定为045,干膏得率对疗效影响较小,是2顾慧吕圭源陈素红何首乌补肝肾、益精血、强筋骨”功服用剂量、剂型等确定的依据,因此综合评分权重效相关的药理研究[世界科学技术,2008,102:58[3]时东方宋策郑梅竹等白鲜皮抗炎有效组分的分离及抗炎系数设为01。活性研究[J抗感染药学,2008,2236):2132在试验中发现二苯乙烯苷具有较强的光、热不稳[4张丽娟贾俊,王小焕等克银丸质量控制方法研究现代定性,并对其进行了研究。研究结果表明液体状态仪器,2012,18(2)39的二苯乙烯苷在紫外光照条件下不稳定,随着光照国家药典委员会中华人民共和国药典(一部川S北京:中国时间的增加,发生转化反应,即由反式二苯乙烯苷医药科技出版社,2010:296.转化为顺式二苯乙烯苷,且最大吸收波长由320m紫伍小燕黄权芳唐爱存正交试验法优选益肾青滋制备工艺移到285nm;液体状态的二苯乙烯苷在髙温条件下不中国实验稳定,随着温度的升高,二苯乙烯苷质量浓度减小H中国煤化工CNMHG王编辑:胡慧玲)