乙醚、乙醇用于果蝇麻醉的研究

生物学通报2007年第42卷第8期乙醚、乙醇用于果蝇麻醉的研究郝大翠姚明镜刘焰(华中农业大学植科院遗传教研室湖北武汉43070)摘要在以果蝇成虫为材料的实验中,麻醉剂的使用剂量是实验成功与否的重要环节。本研究结合乙醚、无水乙醇2种麻醉剂的特点,筛选出了乙醚一无水乙醇复合麻醉的最佳剂量。经比较认为:乙醚;无水乙醉=1:1的配方具有安全范国宽、麻醉效果好的特点。并给岀了其麻醉剂量、麻醉处理时间及其对应的麻醉效果等翔实的数据。有很好的实用性。关键词果蝇麻醉剂量乙醚乙醇苏醒率在遗传学实验教学工作中,果蝇麻醉是一个重要记录开始麻醉时间、全部果蝇静止不动时间、第1的技术环节。现在普遍使用醚作果蝇麻醉剂,它具有只果蝇苏醒时间、2h苏醒只数、全部果蝇苏醒时间。麻醉快、苏醒快的特点。但如果剂量太小,果蝇保持昏计算昏迷时间和2h苏醒率:麻醉时间是指果蝇从活迷状态的时间短。常需要进行第2次麻醉。如果剂量跃状态到纷纷坠入瓶底静止不动的时间;昏迷时间是过大,昏迷时间虽然延长,但易造成过度麻醉而死亡。指从全部静止不动至有1只恢复活动能力开始爬动麻醉程度的掌握和控制是个难点。我们在多年的实验的时间。所需时间用分表示。苏醒率是2h的苏醒只教学及实验材料准备工作巾,发现用乙醚—乙醇的混数/被试蝇数合溶液作麻醉剂,果蝇静止不动,可观察的时间长,安1.2.2乙醚、醇混合液不同比例试验将乙醚、乙全范围更宽。为此,本试验拟从麻醉剂的配方、用量、醇按1:0、1:12:131的比例分设4个处理,以单的麻醉处理时间入手,改进对果蝇麻醉的方法,以达到乙醚为对照剂量设定为60、120μ、240μL,麻醉延长昏迷状态的时间,并确保较高的苏醒率的目的。的处理时间分成3min、5min、7min、9min。与121材料与方法所不冋的是,当麻醉处理时间到,迅速拔掉棉塞,将被1.1材料黑腹果蝇( Drosophila melanogaster)野生型试蝇倒入培养皿里计数。3次重复。長中的果蝇数是3(红眼,长翅,直刚毛)和突变型(白眼,小翅,焦刚毛)。次重复之和,昏迷时间是3个重复的平均值。记录昏迷12方法时间和2h苏醒率。1.2.1果蝇对乙醚、乙醇的耐受试验我们分别将乙1.2.3不同果蝇品种对乙醚;无水乙醇=1:1混合液的醚、乙醇设定为30μ、60μL、90μ、130μ、170μ反应选野生型和突变型果蝇用乙醚:乙醇=1:1的混5种不同的剂量,麻醉前,选用长12cm,q3.8cm的指合液240μ,麻醉处理时间7min麻醉方法和统计形试管,配上棉塞。在离试管底1cm处作上标记,制观察方法同122作出1个约12cm3的小麻醉室(见下图)。随机取7d2结果分析2.1果蝇对乙醚、乙醇的耐受性:从表1可看出果巍对2种麻醉剂麻醉的速度随剂量的增加而加快。30μL60μL、90μL、130μ、170μ5个不同剂量的乙醚处理,其麻醉的时间分别为4min、1min、lmin、0.83min0.5min;而无水乙醇处理组30μ~90μ的3个处理无1只达到静止不动的状态。当剂量增加到130μI170μ时,分别在19.0min、21.0min被试蝇才慢慢进入麻醉状态。130μ处理下第1只果蝇苏醒的时间比同剂量的乙醚处理推迟了124min。复苏的情况差异更大。乙醚组130μ以下剂量处理的在120min以内果蝇小寐醉窒示意图苏醒率达100%。同剂量的无水乙醇8h后才苏醒了以内的健壮成蝇装入试管里,使每瓶有成蝇30只以%,至24h苏醒30%;170μL无水乙醇处理8h上。麻醉时,用移液枪吸取麻醉剂注入棉塞的中央位24h的苏醒率比130μ处理更低,分别为2.5%和置,迅速将棉塞推到离试管底部1cm处。使棉塞下端12.5%。由此可见,乙醚麻醉快苏醒快,复苏率高,昏迷的弧线最低点与离瓶底1cm的横线相交。置20-25℃时间短。而乙醇麻醉慢,所需剂量较大但苏醒慢,昏迷2007年第42卷第8期长。若将这3种麻醉剂的特点结合将有可能获得更好22乙醚、无水乙醇混合液使用结果分析的麻醉效果。221不同剂量、不同时间、不同比例纯乙醚处理果表1果蝇对乙醚和乙醇的耐受极限比较蝇的麻醉状况当乙瞇(ck)剂量为60μL,麻醉处理苏醒情况时间3min时昏迷时间为186min,处理时间5-9min剂被试麻醉昏迷全苏2b8h24h时昏迷时间均在20min以上;这4种处理时间下的2h果蝇时间时间醒时叫数(m(m间苏醒苏醒苏醒|苏醒苏l苏理苏醒率均在97%以上。但当乙醚的剂量增至120μL时,6051/m数*(%数率(%数(%)麻醉处理3mn其昏迷时间可达26mn以上但2h苏醒率降至87.6%,并随处理时间延长及剂量的增加2h306363100苏醒率急剧下降。364651100222乙醚无水乙醇=3:1的不同剂量不同时间处理13039083310139100下果蝇的麻醉状况由表2可见当乙醚:无水乙醇=3:1170440531156的比例时,剂量为60μL的各处理2h苏醒率均在无:3049尤异迷4910099%以上,但果蝇昏迷时间短,坞低于14min;当剂量水为240μL时昏迷时间均在22min以上,但2h苏醒90331100率急剧降低,处理3min时为93.8%,5min时即降为130491916300714|1530170402001|2.55125341%;当剂量为120μL时处理时间在5~9min的3个处理昏迷时间在21mn-336min,2h苏醒率均在表2乙醯、乙醇混合液、不同比例的试验结果麻醉处理时间乙醚:乙醇剂量3 min57 min果蝇数昏迷时间h苏限率果辑数昏迷时间对2h苏腰半果绳数昏迷时间x2h苏醒利果蝇数x迷时间刘2h苏醒革60μL15520±11452.60.69871:1120μ213901000232.6±0.699177240±1.099187253±21860610771333530698410t101001351161598495123159921120ux15911+06127140±1.0100174|146±2365183±4995640叫159183±2.51001722205698129280+3087418143+10060160uL13960±529931148.3±4.711610.0x4610013.6±2.l3110叫u131176061001212104010012527+23100178226+2393819637.61063411483861547422714.3:2946260μ149186±1510016420+1.09901322.+231026±21乙醚CK120μ1101266128761142762159313527010372105293±4249.5240叫19270=103081381309321391490±13091416本处理第3重复无一只苏醒,故无法计算昏迷时间99%以上,从昏迷时间及安全性两方面考虑,此3个处1:1的混合液剂量为120μL和240μ处理时间分别理是可用的配方/剂量处理时间组合为579min时,果蝇的昏迷时间均在22min以上,最223乙醚:无水乙醇=2:1的不同剂量不同时间处理长者为9min处理时的35min,2h苏醒率均在98%下果蝇的麻醉状况表3中乙醚:无水乙醇=2:1时,以上,处于昏迷状态时间长、安全性好;当剂量为仅有剂量为240μ,处理时间5min的处理,果蝇的昏60L时的各种时间处理及120μ、240μ3min处迷时间达到22min,同时2h苏醒率达98%,从昏迷理下,尽管2h苏醒率都在97%以上,但昏迷时间均不时间和安全性上看此配方/剂量/处理时间组合较适用到20min60μL、120μ剂量下各处理及240L/3min的处理23不同果蝇品种对乙醚:无水乙醇=l:l麻醉剂的反虽2h苏醒率在95%以上,安全性好,但昏迷时间太应野生型和突变型果蝇对以乙醚:无水乙醇=1:1的短在18.3min以下;240μ7min及240μL/9min处麻醉剂240μL7min处理后的麻醉状况见表3。野生理虽延长了昏迷时间,但2h苏醒率急剧下降,分别型的昏迷时间为290min,突变型为25.6min,2品种为874%和601%,安全性差昏迷时间无明显差异,其2h苏醒率均为100%。结果224乙醚:无水乙醇=1:1的不同剂量不同时间处理表明乙醚:无水乙醇=1:1的混合液不论是对生活力强的野生型还是对生活力很弱的突变型果蝇均适用生物学通报2007年第42卷第8期表3不同果蝇品种对乙醚乙醇=1:1的混合液反应是不一样的。本实验有16个配比/剂量/时间组合1次处埋:240μ7mn麻醉其昏迷时间在15-33min、(昏迷时间在20min品种成数(x)昏迷时同m(2b苏醒率以上的有10个组合)2h苏醒率在8%以上(见表2其效果明显优于“几滴乙醚,半分钟”的原方法。其中野生型(红限、长翅,直刚毛290±36突变型(眼短翅、焦刚毛)151256±4500乙醚:乙醇=:1的配比适用的剂量(时间组合范围宽它不仅适于对生活力强的野生型果蝇的麻醉,对生活3讨论力很弱的突变型也同样安全有效。1)在目前使用的多种遗传学实验教材中,用于果5)在麻醉空间不变的情况下,麻醉剂的用量,和蝇杂交的麻醉方法一般都是依照“几滴乙醚、半分钟”麻醉处理的时间是可以调控的。使用者可以根据实际的原则其具体操作方法多种多样,因为没有限定麻醉需要在表2中选取所需要的麻醉剂量及麻醉处理时剂量和麻醉空间麻醉效果各不相同。我们曾以4、6、8间的参数。这一结果,是对“几滴乙醚,半分钟"的原方滴的剂量半分钟的麻醉时间做过对比实验。其昏迷时法进一步完善,不仅在遗传学实验教学中方便了教师过短,分别为43min、8.0min、8.3min,难以满足实对学生完成麻醉技术的指导,对以果蝇为材料的研究验教学及实验材料准备的实际需要。工作者也具有一定的实用价值。我们认为择迷时间在20mn左右,2h以内有6)本试验发现川乙醚、乙醇混合液麻醉后苏醒的98%以上的被试蝇能苏醒则该麻醉深度对杂交亲本而果蝇,基本上能正常交配和产卵、并繁殖后代。但其对言是合适的。既能给学生足够的操作、观察时间,勿需果蝇及后代的生活力、体质方面的毒理作用还有待进2次麻醉;也能确保高复苏率;提供足量、健牡的受试步研究。主要参考文献2)若使用单一乙醚作果蝇麻醉,从昏迷时间和安1余君遗传学实验指导北京农业出版社,191全性两方面考虑,有必要在“几滴乙醚、半分钟”的基2慧民,袁静遗传学验,武汉:武汉大学出版社,J94础上减少乙醚用量延长麻醉处理时间。本试验表2中3卢龙斗常重杰遗传学实验技术,北京:中国科学技术大学出版乙醱用量60μL(约2滴)麻醉处理时间3~7min,昏社,1996迷时间可达18.6-22.7min,2h的复苏率99%以上。4杨大翔遗传学实验北京:科学出版社,2004.王建波方呈祥鄢慧民等遗传学实验教程.武汉:武汉大学出版根据本试验结果,若乙醚-乙醇混合使用,能在社,2004麻醉速度、昏迷时间、耐受程度、复苏率多方面取长补6刘祖洞汪绍慧遗传学实验第2版北京高等教育出版社1987短,能起到加强麻醉效果的作用。是较好的复合麻醉7张贵友吴琼林琳.通遗传学实验指导北京:清华大学出版社,剂4)乙醚和乙醇的配比不同,麻醉昏迷时间效果也(E-mail: haodacui@mail hzau. edu. en)(BF)血液蛋白质预示心脏病风险胆固醇”(低密度脂蛋白)氧化,导致动脉粥样硬化。它还会损害“好胆固醇”(高密度脂蛋白)对身体的保护作用,并减少血有时候,一个人明明看上去非常健康,其实患心脏病的风液中一氧化氯含量,而一氧化氮是放松血管、使其柔软通畅的险很高。科学家新近发现了解释这种怪现象的一个线索:血液重要物质中的一种蛋白质会损害心血管系统,其含量过高是心脏病的早以往的研究曾经发现心脏病患者体内血清髓过氧化酶含期预兆量高,荷兰科学家的这项新研究是针对健康人患心脏病风险与种蛋白质被称为血清髓过氧化酶(MPO),由血液里的血清过氧化酶含量之间关系的首次大规模研究。199-1997白细胞分泌。它的任务原本是杀灭有害细,但荷兰医学学术年间,英国诺福克郡居民参与了一项关于磨症和营养的研究中心的一个研究小组在即将出版的《美国心脏病学院周刊》上这些研究对象的血样被冰冻保存下来,荷兰科学家在新研究中报告说,该蛋白质会造成动脉发炎,破坏血液里的保护性物质。利用了有关数据和血样在心脏病的典型症状出现之前很久,血清髓过氧化酶含量增加在参与研究后平均8年的时间里,这批研究对象中有1138就发出了有害物质积累的信号。人患冠心病、对比研究发现,在性别椭同、年相近的人群中科学家认为,这项成果开辟了心脏病研究和诊断的一个与未患病的人相比患上心脏病的人当年参与研究时留下的血新领域。详细研究相关病变过程,将有助于利用血液来及早发样中血清髓过氧化酶含量明显更高现患心脏病风险较高的人。血湳髓过氧化酶会使人体内的“坏辆自《科学时报》2007年7月5日