乙二醇对绵羊冻精效果的研究

第22卷第6期试验研究二醇对绵羊冻精效果的研究刘玉峰,李武,兰翠(东北农业大学动物科学技术学院动物繁殖教研室,哈尔滨150030)摘要:以含甘油的四组稀释液为对照组,以等量的乙二醇替换甘油作为相应的试验组研究乙二醇对绵羊冻精效果的影响。结果表明,试验组冻后精孑活力、顶体完整率显著髙于对照组(P<0.05),并确定了3号试验组稀释液为最适精液冷冻配方,其乙二醇浓度为10%时冷冻保护效果最好关键词:乙二醇;绵羊;精液冷冻中图分类号:S826.34文献标识码:A文章编号:1007-9726(2002)06-0009—03从1974年开始,我国进行绵羊冷冻精液的保存液冷冻保存中作为冷冻保护剂,研究乙二醇对绵羊研究,但其发展较慢,原因主要是解冻后精子复苏率冻精效果的影响,以期找岀更适于绵羊精液冷冻的低,异常精子多,受胎率仍低于正常受胎率,而这些新途径。主要的关键是对精子的防冻能力及解冻后受精力的1材料与方法维持仍没有得到很好的解决。目前绵羊精液冷冻稀1.1材料释液中最常用的抗冻保护剂是甘油,但在常温下甘1.1.1实验动物本实验所采用的绵羊是黑龙江油对精子有毒害作用,对冻后精子的活力和精子顶省牡丹江田园牧业种羊基地于2000年从澳大利亚体完整率具有很大的负面影响、21。本试验借鉴胚胎引进的道塞特种公羊,这些羊采用放牧+舍饲的饲快速冷冻过程中,用乙二醇作保护剂较甘油易达到养方式,在采精期间补喂胡萝卜和鸡蛋。非晶状态,不易形成冰晶,且乙二醇对细胞毒性1.1.2实验器材羊用假阴道和集精杯,显微镜温度计,漏斗,天平,消毒锅,0.25ml冷冻细管,酒收稿日期:2002-05-15精,凡士林,生理盐水,伊红,红细胞计数器。各种稀第一作者简介:刘玉峰(1978-),满族,黑龙江双城释液均采用国产试剂配制。人。动物遗传育种与繁殖专业在读硕士1.2方法较小可在较高温度下加入的特点将其用在精1.精液的采集和品质评定常规假阴道采精:明卵泡并没有发育到成熟的程度。如卵泡大量发育予补饲精料或补饲量很少,日粮基本以秸秆为主的成熟,必产生大量雌二醇,绵山羊发情周期中激素变条件下,受胎率仅50%以下。因此,要提高波杂羊繁化证明,正是发情周期中1~2次雌激素高峰和孕酮殖率,必须注意提高日粮能量、蛋白质水平,并提供的下降对下丘脑一垂体产生正反馈作用,于是引起定量青绿饲料。按35kg活重计,每天代谢能必须LH浓度剧增,促使排卵。从表上的数据可以看出,在9.5MJ以上,粗蛋白在140g以上,比较合适。5只羊没有雌激素波峰,自然不可能排卵,但有2只参考文献山羊出现一次小峰值,分别达23.97和23.72pg/ml,[1]程瑞禾湖羊卵泡及卵母细胞的生长与闭锁的研究但此时孕酮的峰值却偏高,说明这类羊卵泡不可能J].中国养羊,1989,(2):17~19.发育成熟至排卵。因此如何调整性激素之间的浓度V凵中国煤化工方仙阳汤对山羊生殖内分泌关系,以恢复卵巢的机能,还需进一步研究。CNMH周期和妊娠期外周血浆中孕根据我们从不同饲养条件不同羊场观察表明,雌二醇和睾酮的浓度变化[.江苏农学院学报这类羊受胎率各地很不一致,主要原因在于饲养条990,11(1):61~65.件有否改善。一些羊场在山羊发情季节采取补饲4]技术讲座,激素繁殖调节的关键[J].黑龙江动物繁铁青绿饲料共娶舍饲半放牧何养方式时,波杂殖,2001,9(3):17~1羊受胎率可达上;有的羊场全年舍饲,不给10中国草食动物2002年精液采岀后,肉眼观察评定精液的颜色、浑浊度;稀1.2.3精液处理释后镜检目测判断其密度和活力。精子活力在65%1)精液冻前处理:精液采出后,立即用显微镜以上的鲜精,其外观、密度及活力正常者用于冷冻保目测其活力,并用微量注射器量出其体积,自然降温存至与室温相同的温度,将采岀的种公羊的精液等分精子计数按原精液做200倍稀释,滴入红细胞成8份,按上表四种对照组及其相应的试验组进行计数板,立即在40倍显微镜下观察,计数死精子数1:1稀释并检查精子的活力。稀释后的精液采用逐和总精子数及每毫升所含的活精子数,并以此算出级降温法,在1~1.5小时内,使稀释的温度降到4精子的存活率。用此数据作标准,衡量精液质量和冷5C,然后置4~5C的冰箱内平衡2~4小时冻效果,并对目测结果进行校正。顶体完整率测定采2)精液的冷冻:在4~5C将精液用0.25ml的用姬姆萨染色法观察顶体完整率塑料细管分装后,放在自制的液氮飘浮器上,液氮飘1.2.2稀释液及保护液的配制及筛选按成分比浮器距液氮面1.5~2.0cm,液氮熏蒸5分钟后,将例配制以下稀释液,其成分见表1。装精液的细管放入液氮内(-196C)冷冻表1所述四种精液冷冻稀释液配方作为对照)精液的复苏:将在液氮中保存的细管精液迅组,将其配方中的甘油替换为等量的乙二醇作为相速放入40C水浴中解冻30秒。解冻后立即检查解冻后活力表1四个对照组稀释液配方基础液I液I液组别乳糖柠檬酸钠葡萄糖三蒸水取基础液卵黄甘油取I液甘油2.25g23.0g100ml80ml94ml1.5g15ml94ml11.O100ml71.5ml25ml3.5ml2结果与分析的保护作用比甘油好。根据以上稀释液的解冻后活2.1精液质量精液呈乳白色,似云雾状翻腾;无力,我们确定3号试验组(乙二醇)为最适合的绵羊异味。目测及计数活力均为0.8,密度为18.6~22.4精液冷冻配方。亿个/ml2.3最佳保护剂浓度的确定选用3号试验组稀2.2不同稀释液的冷冻结果详见表2释液,将Ⅱ液中乙二醇的浓度分别改为4%、6%8%、10%和12%时进行冷冻试验。解冻后在显微镜表2不同稀释液对精液冷冻效果的影响下记数活力,分别为0.385、0.421、0.43组稀释后平衡后冻后目冻后计冻后顶体0.434。其结果表明,在稀释液中乙二醇浓度为10%别活力活力测活力数活力完整率(%(V八V)时,即冷冻精液中乙二醇浓度在5%(V/V)1对照0.750.700.300.298±0.0140.25时其保护作用最好1试验0.750.750.300.310±0,0346.833讨论2对照.800.750.302试验0.750.700.250.264±0.0345,23在家畜的精液冷冻过程中可采用的冷冻保护剂3对照0.800.700.350.346±0.0246.25种类很多,其中以甘油最常用,效果比较稳定。但甘3试验0.800.700,400,421±0.0356,44对照0.750.650.300.312±0.0141.224试验0.750.700.350.357±0.0345.87THa中国煤化工子从阴道向子宫的移动其胞的速度较水分子慢,在常CNMHG,会增加冻后精子的畸形率。近年来在动物胚胎冷冻保存方面研究发现,乙通过乙二醇试验组和甘油对照组的冻后活力比二醇冷冻效果不亚于甘油,且其分子小,毒性小,渗较,差异显著(P<0.05),说明用乙二醇作保护剂具入或渗出细胞的速率与水分子差异不大,所以渗透有比甘油更好的效果。试验组和对照组冻后顶体完整率比较,差异壹暂P<0.05)说明乙二醇对顶体压反应也较小,用乙二醇冷冻胚胎解冻后不一定要求脱除保护剂,可直接移植。但是乙二醇在绵羊精第22卷第6期试验研究冷冻方面的应用研究报道还很少子顶体完整率的提高,使输精后的受胎率也随之得本试验选用乙二醇作为精液冷冻的保护剂,并到了提高对其适宜浓度进行了研究,试验结果表明,绵羊冷冻参考文献精液中乙二醇以5%(V/V)时,其保护效果最佳。试「1]谢成侠,刘铁铮编著.家畜繁殖原理及其应用[M南验组精液稀释后活力与平衡后活力相比较,变化不京:江苏科学技术出版社,199大。且精液解冻后在常温下放置12小时,其活力仍[2]邰秀林,龙翔.不同冷冻保护剂在猪精液冷冻中的作能满足输精要求,说明乙二醇在常温下(15~20C)用效果[J].四川畜牧兽医学院学报,1998,12(2);25对精子无毒害作用,用乙二醇作为精液冷冻保护剂具有比甘油更好的效果,且能明显提高冻后精子的[3]赵晓娥,王光亚等布尔山羊细管冷冻精液研制初报J].西北农业大学学报,1999,27(2):19~23顶体完整率。其原因可能是这种保护剂在温度较高4]王锋,金穗华,乙二醇、丙二醇对牛冻精效果的影响时加入,既无毒性又可充分渗透到精细胞内,使精子LJ].黑龙江动物繁殖,1998,6(4):11~13.在快速冷冻过程中更易达到非晶状态,不易形成冰[5 Graham J W. Frances H P Animal Reproductive Sci晶,从而降低细胞内冰晶的数量和体积,对精子起到1986,(10):317~324保护作用精子顶体完整率与受精能力密切相关,精「6]RoyH, James K(. Cryobiology,192,29:26~384.·……:……鲁·,·…:上接第21页)在遗传结构上彼此非常接近。这可度的遗传分化,但总体上群体之间的遗传分化程度能是长期以来,滩羊产区自然生态环境恶劣、人民生仍然处于一个非常低的水平,群体间在遗传结构上活水平低、饲养管理条件落后且相对封闭,加之一些彼此非常接近。(续完)自然灾害和疾病等突发因素造成的瓶颈效应使得滩参考文献羊群体遗传多态性不是十分丰富1]李积友,韩建林,等.滩羊种质及血液遗传标记研究4结论LJ.中国养羊,1993,13(4):21~22.4.1根据有效等位基因数(N)、多态基因座百分2李积友,白雅琴,等滩羊血红蛋白(Hb)分布的地区数(Pm)、 Shannon指数(Ⅰ)及Nei氏预期基因杂合差异研究[].甘肃畜牧兽医,1995,25(2):6~8度(1D)等指标得出:甘肃滩羊地方群体存在一定程3]李积友韩建林等血清运铁蛋白多态性的研究[中国畜牧杂志,1995,(4):21~23度的遗传变异,但变异程度不是很高42甘肃滩羊地方种群之间的平均基因多样度4]李积友,韩建林,等碱性磷酸酶和淀粉酶活性分布的研究[冂.草食家畜,1995,(3)(D)和基因分化系数(G)以及Nei氏遗传同质度[51]李积友韩建林滩羊地方种群亲缘关系的生化遗(ⅠD)和遗传距离(D)均说明:甘肃滩羊是由共同祖传学研究[A].中国动物遗传育种研究,北京:中国先繁衍进化而来的,尽管滩羊群体之间存在一定程农业科技出版社,1995.206~211aay。 Ye YnYY3Y3Y30Y513Y30Y0Y3Y是 YyYsYYYRY是y￥是ayy是yy欢迎订阅2003年《乳业科学与技术》《乳业科学与技术》原名《上海奶牛》,1978年创办至今,已连续按期出版24年100期。《乳业科学与技术》为集奶牛与乳品两大行业为一体的综合性科技期刊,主要内容有:乳品研究、乳品加工、新品开发、乳品微生物、乳质检验、乳业机械;奶牛繁殖育种、生理生化、饲养管理、饲料营养、疾病防治与环境卫生以及乳业论坛、乳业法津法规、标准与质量理、读者信箱及商品市场信息等《乳业科学与技术》的主要读者和服务对象中国煤化工行业的各级科研、生产、经营、管理、教学人员以及广大的奶牛养殖人员。CNMHG《乳业科学与技术》为季刊,每年出版4期,国内外公开发行,刊号ISSN1671-5187CN31-1881/S。大16开本,彩色封面,全铜版纸,每期单价7.50元,全年30元。自办发行,可随时汇款随时订阅,汇款地址200072上海市闸北区彭联路101号《乳业科学与技术》编辑部收即可。如需正式发票,请特别注眀。(为提高服务质量和瞎明收件人的详细地址包括邮编、联系电话等。谢谢合作:)