环肽合成研究 环肽合成研究

环肽合成研究

  • 期刊名字:科技信息
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  • 论文作者:孔凡琳,王印
  • 作者单位:徐州医药高等职业学校,徐州生物工程高等职业学校
  • 更新时间:2020-07-04
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论文简介

2010年第23 期SCENCE & TECHNOLOGY NFORMATION。科教前沿o科技信息环肽合成研究孔凡琳'王印2(1.徐州医药高等职业学校江苏徐州221116;2.徐州生物工程高等职业学校 江苏徐州221006)[摘要]环肽由于其稳定的结构特性在生物模拟,药物设计,纳米与分子器件,生物传感器以及催化剂等方面起着越来越重要的作用,本文介绍了近年来环肽化合物的合成及其应用的一些进展。[关键词]环肚合咸;策略;固相多肽合咸;液相多肽合威;化合物库Research on Design and Synthests of CyelicPeptides[Abstract]Cyclic peptides are playing more important role in biological modeling , pharmaceutical design ,nano- and moleculardevices , biological sensors and catalysts because of their stable structural characteristics . the design , ynthesis and applications of cyelicpeptide compounds were discussed in this aricle.[Key words]Cyclic peptides; Synthetic strategy ; Solid-phase peptide synthesis ; liquid-phase peptide eynthesis ; Compounds library0引言.3 实验步骤.20世纪80年代由于Merifed固相合成方法的改进,促进了半1.3.1 CC-10-C1线性肽的耦联自动,全自动多肽合成仪的发腿,使得肽和蛋白质的合成技术达到了一1)取 2.0mmol氯甲基树脂,置于玻璃反应柱中,加Sml DMF,溶个高峰。到日前为止,人们已实现Y由高达数百个氨基酸(或以上)组胀15分钟.抽干。2)反应柱中连续两次加入新配制的20%DBLK溶液,进行去保成的线状多肽的合成”,并月有着相当高的收率。随着对越来越多的生护,第-次5分钟,第二次7分钟。脱去树脂上的Fmoe保护基,然后用命现象及蛋白质功能认识的深入,以及对药物设计的前导化合物和各DMF和DCM洗涤7-8逾至反应柱中无游离Fmoe及DBLK溶液,抽种功能材料需求的扩大,人们更加关注具有特殊形状和特殊性质的多肽如环肽,变晶肽,肽库等。新的复杂的多肽化合物中,环肽无论从何种意义上讲都可以说是3)称取2.973g Fmoc -Gly-OH(甘氨酸)置于柱中,用DMF溶解,同最重要的一种。其特殊的结构以及对酶降解的稳定性使得它的成用范时用氮气搅拌,然后加入DIPCDI 9.7ml,反应2个小时。围超出所有人的预料.特别是使用一些特殊的方法得到某种指定结构4)用玻璃棒取少许用于茚三酮检瀏.肽树脂完全透明。的环肽时,人们甚至发现它在药物,纳米材料,生物离子通道及超分子的偶联。5)用DMF洗4遍,把未反应的氨基酸冲洗干净,便于以后氨基酸自组装等领城有着极其泛的用途"。但环肽复杂的结构使得有机化6)加入20%DBLK,同时氮气搅拌,第- -次5分钟,第二次7分钟,学家合成环肽仍然需要运用熟练的技巧并花费大载的时间--即使是以脱去Fmoc保护基。中等尺寸的环肽,要使收率达到50%以上并且纯度超过97%.依旧是7)取少许树脂用于茚三酮检测,肽树脂为蓝黑色。一件挑战性的工作。8)称取1.492g Fmoe- Met- 0H(蛋氨酸)置于反应柱,用DMF溶解,1本文将 以活泼脂法为例进行讨论同时用氮气搅拌,然后加入9.7ml的DIPCDI。9)重复以上步骤至所有的氨芎酸偶联完全为止。1.1 活泼酯怯基本原理活泼酯法中活化羧基和环合反应是分两步进行的。活发酯相对很13.2 CC-10- C1全保护肽的裂解1)把以上反 应好的粗肽置于250ml 的圃底烧瓶中并放入-个搅稳定,一般不需要纯化可直接用于环合反应。几乎所有可用于偶联反摔应的活泼酯都可用于合成环肽叫,主要有对硝基酚觜.N-羟基琥珀酰2)配裂解液:三氟乙醇(TFE):二氯甲烷(CH2CL2)= 95:2.5:2.5亚胺酯、五氟苯酯和2.4.5-三氟苯酚酯。3)将裂解液倒人圆底烧瓶中,并将圆底烧瓶置于磁力搅拌器上,线性多脑的c嘴羧花与对硝基融N-陉蒸骢珀酰亚胺五氟苯酚打开电源开关,并缓慢调节调速按钮 至合适的速度。搅拌2个小时。或24.5-.三氨苯酚,在DCC或其他缩合剂存在下.于低温反应,很容易4)将裂解液过滤到2L的广口瓶中,并加入1.5L冰冻乙醚,沉降.得到相应的活泼酯。这种N端通常带有BOC或Z保护的活泼酯在酸半个小时,倒掉上清液, 将沉淀均分在四个离心管中,于离心机中离性条件下脱去保护基,形成活泼酯的氨卤酸盐在弱碱性稀溶液中,如心,转速 30/分钟,时间3分钟。然后再洗康一遍。在吡啶,DMF或二氧六环- -类介电常数较大的溶剂中,保持pH8~9,5)将离心管用锡纸封口,并在锡纸上打几个孔,便于通气。然后放加热(60~100C)或室温搅拌数小时至数日,最终叮得到环肽。于真空泵中抽干。1.2实验内容6)取出称重,得粗晶2.302g。GG-10-C1的环化(肽序 H-Iy)-M-y-oV-hr-Hi- . 133 GC 10-C1线性肽的首尾环化Cy-Asn -Gly -OH)1)称取500mg CG-10- C1线性肽.置于500ml的四底烧瓶中,并12.1实验器材敢入一个搅拌子,加DCM250ml ,用于溶解线性肽。并保证浓度控制在玻璃反应柱,圆底烧瓶,移液枪,移液管,干燥臂,电子天平,磁力2m/ml.搅拌器,离心机(帶离心管)2)将圆底烧瓶置于磁力搅拌器上固定,打开电源开关,调节转速,1.2.2原料及试剂氯甲基树脂(产地:上海吉尔),Fmoe -Gly- -OH(甘氨酸,产地:苏州不断搅拌。3)待线性肽溶解完全,以PyBOP/HoBt/DIPEA体系进行偶联。称天),oe-e-0H(蛋赵酸,产地:成都凯奏),Fmoe-Cy-OH(半胱 取 PyBOP 1388 ,HoBt 36mg,同时加人圆底烧瓶,再加DIPEA 0.Smal。氨酸,产地:苏州天马),Fmoc-Va1-0H(纈氨酸,产地:上海吉尔),并补充DCM 200ml。Fmoc -Thr -0H(苏氨酸,产地:苏州天马),Fmoc-His _OH(组氨酸,产4)在常過下攬拌18个小时.铺板.点样。地:苏州天马),Fmoe-Asn-0H(天冬氨酸,产地:苏州天马) ,PyBOP(六中国煤化工!据反应情况适当调节真氟磷酸苯井三唑-1-基~氧基三吡咯烷基磷产地: 上海吉尔), HoBt空度(1-羟基苯并三唑,产地:苏州天马)、DMF(N、N-二甲基甲酰胶,产地:6)HC N M H GATS:EDT:H20= 94;苏州天马).DCM(二氧甲烷,产地:苏州天马)、DBLK(20%六氢吡啶+ 2:2:2)DMF). DIPCDI(N,N-二鼻丙基碳二亚胺,产地:苏州天马)等。DIPEA将裂解液倒人圆底烧瓶,并在烧瓶中放一个搅摔子。将圆底烧瓶(N.N-乙基二异丙腰,产地。西安美联),TA(三氟乙酸),TIS(三乙丙置于磁力搅拌器上,搅拌两个小时 ,取下,用乙酷沉降,离心,得粗脑。基硅烷),EDT(1,2-乙二硫醇),ITFE(三氟乙醇).科技信息。科教前沿oSCTENCE & TECHNOLOGY NFORMATION2010年第23 期2实验结果2.3 CG -10-C1环肽取样迭MS分析结果(图4)。2.1 GC-10-C1 环化18小时后点样图(如图1)。山晨开制:熏仿;甲醇:醋酸=90;8:2A为线性肽B为环肚12.2 HPLC 图谱分析3结果分析2.2.1 HPLC 制备前的图谱分析(图2)。3.1根据点样(图 1)可以看出经过18小时的环化反应,有新的物质生成。3.2 通过质谱分析(图4),主峰的分子最为1035.0,正是所需要的目的峰。说明所生成的新物质为所需要的不脑。3.3 利用活发脂法合 成环肽可取得很好的效果,而且粗肽不需要纯化可直接用于环肽合成,使环肽的合成简单化,不仅可以降低生产成本,而且还能增加环肽的收率。C(乡考文献]圈2[1 ]Merifeld,Enickon Solid Phase Peptide Syntheis.2.2.2 HPLC制备后的图谱分析(图3)。[2]陶慰孙,李惟,姜需明,等,蛋白质分子基础.第三版[M].北京:高等教存出版社,1995:133-147.[3]黄惟德,陈常庆.多肽合成科学出版社.1985.[4]方宏遭多肽类药物制剂研究现状.北京:军事医学科学院生物[4]万宏清.多肽类工程研究所.0007.[5 ]Shid.R.,Neuben.K. Im. J. Pepl Prolein Res. 191.37.502.[6]Famer, CG.A.Audlya.T.Deyle.D.jen.F.Coldstein,G. lot. ]Pep. Protein Ras. 1991:37,198.作者简介;孔凡#(1980- -),男,江苏徐州人,教师,本科,专业方向为临床药学。[责任编辑:常鹏飞]團3●(上接第94页)逐层发现的方法。选取运行本程序所在主机的网关地户清晰地 显示出来,并且提供方便的圈形化界面。基于B/S架构的设址作为初始节点。通过SNMP协议进行拓扑发现。遍历路由表,得到的计为网络管理人员提供更有分布性和实时性,操作更方便、能力更强网络层节点信息后保存于网络层节点数据表中。通过分析路由表获得的网络拓扑管理工具与初始节点所在网络直连的其他网络地址.对其网络进行网关地址的Ping操作,得到部分活动节点,再通过对这些活动节点的ARP表获[参考文献]取,补充完善活动节点数据表。对表中的活动节点进行SNMP探铡,获[1]於成才.善于 Jmx和J2EE的网络管理系统.计算机技术与发展,2006,12.可护取其FDB信息.并将其相连节点保存于链路层节点数据表中。通过对[2]林曼筠.可扩 展的计算机网络管理系统技术研充.中国科学院研究生院.002.链路层节点关系的判断,推测出物理层节点的存在,将其结果保存于[3 ]刘态,中国煤化工瓶扑发现与分析力法D物理层连接数据表中。至此完成对网络拓扑发现。计算机应[4]李子嘎叩计算机工程.2006();3结束语104-106.YHCNMHG本系统有完善的拓扑发现及描绘功能。能保证收集到的网络拓扑[责任编辑:汤静]信息的准确性和完备性.可以将网络拓扑信息组织和存储起来并向用63

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